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guantou

木虫 (正式写手)

[交流] 请教关于realtime PCR产物问题

实时PCR产物的溶解曲线 其峰值有范围吗? 我的产物溶解曲线在87度左右有个单一峰 可能是二聚体吗 ?

高手们指点下啊 小弟谢谢啦

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-4 at 20:49 ]
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

这个不一定是引物二聚体的峰,通常情况下同一个引物产生的溶解曲线的风型都差不多,这样说明你的引物没有问题,相反,会有两种不一样的溶解曲线峰,所以你可以检查一下看看这个溶解曲线对应的是你plate上的哪一个值,如果其余的duplicate的值是相近的,那么你完全可以把该值去掉,否则也会影响你的计算
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2009-04-05 23:10:00
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

首先dimer一般是100bp以下
所以只要产物大于这个长度,溶解曲线就不会出现叠峰
那么此时单一的峰就是产物的峰
但是建议你上机之前先跑普通PCR后琼脂糖电泳
检查是否有杂带
2楼2009-04-05 12:18:13
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