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抗体筛选问题 已有1人参与
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 求助大家：我有一个项目，在自己平台上感觉怎么筛都不满意，在ELISA上倒是有不错的表现，但是我也知道不同平台相同原料可能会有差异，但不应该相差那么大啊！！ 比如灵敏度这些，问问大家，该怎么办？？ |
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【答案】应助回帖
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楼主，我最近才接触ivd，还搞不清楚为什么。下面是我在一家IVD原料公司看到的资料，希望对你有帮助。 网址是：http://www.okaybio.com/topics/sensitivity-assessment-IVD/ 影响灵敏度的因素 （1）抗原和抗体的亲和性：两者的亲和性越高，灵敏度越高。 （2）抗体的标记方法：标记信号物的放大效应可以提高灵敏度，如化学发光、胶体金、胶乳标记等。 （3）抗原抗体反应时间：反应时间的适当延长，可以使抗原抗体的结合反应达到反应平衡，进而灵敏度也提高了。如在化学发光免疫诊断试剂中，抗原与抗体在液相中充分混合至少反应10分钟以上，有时还需要震荡反应以提高反应速率，这样比较容易获得较高灵敏度。 （4）包被抗体与标记物的量：在达到反应平衡的条件下，可以适当增加包被抗体和标记物的浓度，来提高灵敏度。如NC膜上的包被抗体、胶体金标记抗体，微球标记的抗体等。但NC膜的抗体吸附量有限，可以通过优化标记来提高灵敏度。微球是以公家偶联的方式与抗体结合，其灵敏度较高于胶体金。 提高灵敏度的方法 （1）选择灵敏度更高的表标记材料 胶体金是常用的标记物，但由于其具有较低的发光强度及较少的抗体吸附量，限制了胶体金免疫层析方法的灵敏度。而与抗体共价结合的材料，如镧系元素，量子点，吖啶酯，胶乳微球等，有利于提高体外诊断试剂灵敏度。 （2）发展信号放大系统 免疫层析技术灵敏度不高的原因主要是T、C线位置标记物信号不强，可以根据这一不足，优化放大系统的反应条件。有研究表明，通过添加银增敏剂到胶体金免疫层析试剂条NC膜的方法可以提高检测灵敏度10-100倍。另外，改变胶体金颗粒的大小，也可以提高灵敏度。 （3）浓缩样品 通过浓缩的方法增加样品的浓度，，可以提高体外诊断试剂的灵敏度10倍左右。 （4）选择优质的试纸条 如在胶体金免疫层析检测方法中，不同的NC膜具有不同的孔径、疏水性、亲水性及其他性能的不同，会导至灵敏度的差异。 （5）缓冲液体系 合适的缓冲液体系可以稳定抗原抗体的结合能力及抗干扰能力，因此，合适的缓冲液体系也可以体外诊断试剂的灵敏度。 |
2楼2018-09-12 11:19:04