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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 往培养的细胞里加入GM132，想抑制蛋白降解，结果细胞为什么都死了?
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Xshin2829

新虫 (初入文坛)

[求助] 往培养的细胞里加入GM132，想抑制蛋白降解，结果细胞为什么都死了?

我想检测两个蛋白的互作，把两种质粒共转进293T细胞后，发现其中一种蛋白对另一种蛋白有降解作用，于是在转染之后加入蛋白酶体抑制剂MG132，按照说明书上说的，用DMSO溶解，所用浓度为18.5μmol。我先用DMSO溶解MG132，得到浓度为185μmol的溶液，然后5μl加到有495μl培养液的细胞培养孔中，这样MG132的终浓度就是1.85μmol了，因为试剂不够用，我都这样缩小10倍使用了，可是三小时后细胞全都死亡破碎了，我觉得可能是DMSO对细胞有毒害作用或是MG132的浓度太高了，又缩小了2倍使用，细胞还是死了，请问我是不是哪里做错了，想不通啊，求助!

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1楼 2018-08-26 01:04:57
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s272605623

新虫 (初入文坛)
我最近做的实验使用浓度是1μM，细胞是EA.hy926细胞，作用了72h发现细胞全部死光。不知道仁兄现在探索的怎么样了?
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2楼2018-12-05 20:55:58
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Xshin2829

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by s272605623 at 2018-12-05 20:55:58
我最近做的实验使用浓度是1μM，细胞是EA.hy926细胞，作用了72h发现细胞全部死光。不知道仁兄现在探索的怎么样了?

作用时间太长了细胞就会死掉的，一般就加6-8小时就可以收样了。

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3楼2019-01-17 21:31:13
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