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Xshin2829

新虫 (初入文坛)

[求助] 往培养的细胞里加入GM132,想抑制蛋白降解,结果细胞为什么都死了?

我想检测两个蛋白的互作,把两种质粒共转进293T细胞后,发现其中一种蛋白对另一种蛋白有降解作用,于是在转染之后加入蛋白酶体抑制剂MG132,按照说明书上说的,用DMSO溶解,所用浓度为18.5μmol。我先用DMSO溶解MG132,得到浓度为185μmol的溶液,然后5μl加到有495μl培养液的细胞培养孔中,这样MG132的终浓度就是1.85μmol了,因为试剂不够用,我都这样缩小10倍使用了,可是三小时后细胞全都死亡破碎了,我觉得可能是DMSO对细胞有毒害作用或是MG132的浓度太高了,又缩小了2倍使用,细胞还是死了,请问我是不是哪里做错了,想不通啊,求助!

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s272605623

新虫 (初入文坛)

我最近做的实验使用浓度是1μM,细胞是EA.hy926细胞,作用了72h发现细胞全部死光。不知道仁兄现在探索的怎么样了?
2楼2018-12-05 20:55:58
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Xshin2829

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by s272605623 at 2018-12-05 20:55:58
我最近做的实验使用浓度是1μM,细胞是EA.hy926细胞,作用了72h发现细胞全部死光。不知道仁兄现在探索的怎么样了?

作用时间太长了细胞就会死掉的,一般就加6-8小时就可以收样了。

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3楼2019-01-17 21:31:13
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