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氨基酸分析中的问题
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请教一下虫友们,最近在用PITC衍生试剂做氨基酸组成分析 流动相A:0.1mol/L醋酸钠溶液(无水醋酸钠8.2g,加水1000ml溶解,用10%醋酸调节pH至6.5)-乙腈(93:7) 流动相B:乙腈-水(80:20) 流速:1.0ml/min 检测波长:254 运行时间:30min 柱温:40℃ 进样体积:5ul 时间(min) 流动相A 流动相B 0 100 0 4 100 0 12 90 10 25 60 40 25.5 0 100 28.5 0 100 28.6 100 0 32 100 0 取0.1 mol/LHCl溶液、氨基酸对照品溶液和供试品溶液各200ul,分别置进样小瓶中,加1mol/L三乙胺乙腈溶液100ul,加入1mol/L异硫氰酸苯酯(PITC)乙腈溶液100ul,摇匀,室温放置1h,加入400ul正己烷,放置10min,取下层溶液,过滤。 18中氨基酸中只有Asp和Glu衍生后出峰均是是两个分裂峰,同样操作其他氨基酸均是正常一个峰,请问这个是什么原因呢?重复多次均是这样的,大神们指导一下吧 |
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