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938495920

新虫 (初入文坛)

[交流] EDC/NHS活化体系必须要用MES缓冲液么？ 已有4人参与

EDC/NHS活化体系可不可以用TRIS等其他缓冲液进行缓冲，必须要用MES缓冲液么？
请问有那篇文献说MES比较好的？
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酰胺键交联(EDC/NHS)

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1楼 2018-08-21 13:52:57
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consequently

金虫 (小有名气)

大男孩
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不必要，PBS通常也可以，或者HEPES。另外，NHS也不是必要，可以用单纯的EDC也行。
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postDocinSIAT,CAS
2楼2018-08-21 16:25:57
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zf200867

金虫 (小有名气)
★
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2楼: Originally posted by consequently at 2018-08-21 16:25:57
不必要，PBS通常也可以，或者HEPES。另外，NHS也不是必要，可以用单纯的EDC也行。

请问你们检测NHS吗？用什么方法检测？
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3楼2018-08-22 10:10:27
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consequently

金虫 (小有名气)

大男孩
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3楼: Originally posted by zf200867 at 2018-08-22 10:10:27
请问你们检测NHS吗？用什么方法检测？...

在缓冲体系的水溶液里，加NHS也没法检测。本来NHS酯在水里就是不稳定，会水解掉。一般2h就完全水解了，通常也不会去测。只有在有机相里可以通过点板来测，看极性变小就是。
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4楼2018-08-22 12:06:39
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史东生

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by consequently at 2018-08-21 16:25:57
不必要，PBS通常也可以，或者HEPES。另外，NHS也不是必要，可以用单纯的EDC也行。

大神，我又遇见你了，

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5楼2018-08-22 15:37:30
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938495920

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by consequently at 2018-08-21 16:25:57
不必要，PBS通常也可以，或者HEPES。另外，NHS也不是必要，可以用单纯的EDC也行。

大神大神～怎么让微球上的羧基特异性的偶联抗体Fc区域的氨基呀？

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6楼2018-08-26 17:00:49
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consequently

金虫 (小有名气)

大男孩
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6楼: Originally posted by 938495920 at 2018-08-26 17:00:49
大神大神～怎么让微球上的羧基特异性的偶联抗体Fc区域的氨基呀？
...

点特异的标记很难做到，一般需要用非天然氨基酸来修饰特异位点，再通过点击化学或其他方式来反应。单纯的EDC偶联，只能做到随机标记。微球上连抗体我没做过，不过纳米颗粒上连streptavidin我做成功过，需要控制蛋白的量，如果偶联后颗粒沉淀了，可能需要减少蛋白的量。有没有成功，需要看后面的具体实验，看蛋白有没有功能。
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7楼2018-08-27 10:12:52
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youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by 938495920 at 2018-08-26 17:00:49
大神大神～怎么让微球上的羧基特异性的偶联抗体Fc区域的氨基呀？
...

这是个可以赚很多钱的技术……
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8楼2018-09-17 10:56:12
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youjihuaxue2000

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by consequently at 2018-08-27 10:12:52
点特异的标记很难做到，一般需要用非天然氨基酸来修饰特异位点，再通过点击化学或其他方式来反应。单纯的EDC偶联，只能做到随机标记。微球上连抗体我没做过，不过纳米颗粒上连streptavidin我做成功过，需要控制蛋白 ...

大神，能留个联系方式吗：）
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9楼2018-09-17 10:57:38
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