应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 新手求助，离子交换柱纯化蛋白，目标蛋白和杂蛋白吸附很少甚至没有挂住
61/1返回列表
查看: 2919  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

QQQQWwP

新虫 (初入文坛)

[求助] 新手求助，离子交换柱纯化蛋白，目标蛋白和杂蛋白吸附很少甚至没有挂住 已有4人参与

入门菜鸟，最近在纯化一个等电点8.5左右的蛋白。之前分别采用DEAE（缓冲液pH10）和CM（缓冲液pH7）进行纯化。
发现上样后蛋白质随throughout流出很多，阴离子交换柱洗脱时仅有少许蛋白洗出来，而阳离子交换柱甚至在洗脱时基本没有蛋白质（包括杂蛋白）。
我想是不是蛋白质的缓冲溶液离子强度太高的原因？
是否可以用稀释的办法？稀释的比例大概是怎么样的？
另听说可以在烧杯中放入填料进行简易的蛋白质吸附试验，有没有大神可以告知大概的步骤？

问题可能问的蠢，请大家见谅！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-08-20 20:04:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

QQQQWwP

新虫 (初入文坛)
补充一下，我用的破胞缓冲液、平衡缓冲液都是20mM Tris-HCl。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2018-08-20 20:14:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wx612725

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

现在做出来了吗，DEAE应该可以挂柱子啊
赞一下 回复此楼
破釜沉舟
3楼2019-12-12 12:35:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Cube生物

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1、推荐使用高结合载量80mg/ml的填料，如：Cube 31101;
2、可能是孵育时间太短：需要降低上样量和上样流量；
3、可能是填料中沉积的杂质太多，导致填料结合能力下降：需要及时对填料进行清洗；
4、可能是目的蛋白和填料带相同电荷：更换填料或优化缓冲液；
5、可能是填料没平衡好，未完全解离：增加平衡柱体积数及优化缓冲液。
我们是德国库柏生物原装进口哈
赞一下 回复此楼
4楼2020-08-12 14:57:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪色残洋

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有可能是蛋白样品离子强度太高的问题，我也遇到挂不上柱的问题，后面经过蛋白样与缓冲液多次置换可以达到挂柱
赞一下 回复此楼
5楼2020-11-09 11:38:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

masterHT

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

DEAE是弱阴离子填料，挂住能力随PH变化很大的，查找一下蛋白的最适pH,离等电点1个单位间隔尝试一下，比如7.0左右的buffer。不行的话就换强阴离子填料，这个pH对其结合影响不太大，工作pH范围还是挺广的。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2021-02-08 17:55:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 QQQQWwP 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 19:34 by lXgU0RvNTDC9
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 19:31 by lXgU0RvNTDC9
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 5/250 2026-08-23 18:55 by lXgU0RvNTDC9
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 18:46 by lXgU0RvNTDC9
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 10/500 2026-08-23 07:17 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 炎黄贵胄 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭