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qingqingcao288

木虫 (小有名气)

有些转化子没能表达蛋白、甚至没有活力,而有些却可以,我就遇到了这种问题。
11楼2009-04-05 23:09:38
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

哦!这是什么原因呢?可否做出解释?
赠人玫瑰,手有余香。
12楼2009-04-06 12:18:19
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chinosaur

木虫 (正式写手)

求购IQ卡

引用回帖:
Originally posted by 胡笳桃子 at 2009-4-5 20:25:

可是我提质粒验证了啊,怎么会是假阳性呢?

怎么提质粒验证啊?有质粒就是阳性的吗?肯定 不是啊!所有的转化子肯定都能提出质粒来的,没有质粒他就不能在板子上长了。
我验证的方法是PCR SCREENING和表达验证双管齐下,然后挑选这两个验证都是真阳性的去做测序,测序是对的才能最终确定克隆是对的。
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13楼2009-04-06 22:52:30
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by chinosaur at 2009-4-6 22:52:


怎么提质粒验证啊?有质粒就是阳性的吗?肯定 不是啊!所有的转化子肯定都能提出质粒来的,没有质粒他就不能在板子上长了。
我验证的方法是PCR SCREENING和表达验证双管齐下,然后挑选这两个验证都是真阳性的 ...

噢这样的,好的,谢谢了。
赠人玫瑰,手有余香。
14楼2009-04-07 18:29:56
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melodyxin

铜虫 (小有名气)

如果只做质粒的双切和PCR验证应该也可以的吧?
15楼2009-04-17 23:57:27
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

转化长出来的菌挑5~6个单菌落提质粒,同样的条件下再提个空质粒,跑电泳看一下结果,一般空质粒小会跑的快,重组质粒大会跑的慢,在电泳图上看重组质粒就像是抬高了,你挑抬高最明显的个那个质粒去测序就行了,抬高验证比PCR验证要好的多,测充结果更比双酶切结果准的多,所以双酶切这个完全可以不做,省功又省钱
16楼2009-04-18 00:27:04
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