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求助，RNA提取完跑电泳提示RNA降解？已有2人参与
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Trizol法提取脊髓RNA 抽提步骤 1． 匀浆 先加0.2ml的Trizol溶液于1.5ml无酶EP管中，取约50mg鼠脊髓组织放入，电动匀浆器研磨30s，再加入0.3ml的Trizol溶液，再次研磨30s，室温静置5分钟。 2． 分离阶段 每1mlTrizol中加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管30秒，使其充分混匀，室温静置3分钟。后13000rmp，4℃离心15分钟。 3． RNA的沉淀 将上层水相转入新的1.5mlEP管中（约200ul），加入0.2ml（与上清液等体积）异丙醇，上下颠倒10次，室温放置5min，后12000rmp，4℃离心20分钟。 4． RNA的洗脱 小心倒掉上清，留取沉淀。加0.5ml现配的75%的乙醇（DEPC水配置）振荡洗涤RNA沉淀一次，后10000rmp，4℃离心5分钟。 5． RNA的再溶解 小心倒掉上清，取沉淀置超净工作台开风机吹干（约10分钟，待RNA沉淀变透明）。再在管中加20ul的DEPC水溶解，测浓度。（未在55-60℃下孵育10分钟助溶） 测浓度值如下，电泳液是20天前配置的，电泳槽和制胶板、梳子没有无酶处理，这个步骤会导致RNA的降解吗？（120v 30min电泳） 请各位大神指导哪些步骤出差错了？是电泳过程的问题还是前期提取RNA是就有问题？还有哪些地方需要改进的  微信图片_20180815095401.jpg  微信图片_20180815101053.jpg  Inked微信图片_20180815101053_LI.jpg |
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2楼2018-08-16 12:01:44
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3楼2018-08-16 12:48:42
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