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sjzliuwei

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助:请高手帮忙设计PCR引物

求助:PCR引物
      我有一序列用于做原核表达,但总扩增不出目的片段求教高手设计引物。我之前用的是BamH1和Hand3双酶切,PET28a表达载体!感谢感谢!!!
序列见下,179位atg为起始密码子601位taa为终止密码子
1 cttgatctgt ttgctttgtc agtattggtt aacgagcgac caggaactat ctgttggatc
61 gttctcggtt ttgagggatc gcggatcccg attcctggtc tgcacgcctt ccttttgaat
121 ccccatctat tgtgatttct tgagatccgt ttggagtcta cggacctgcc ggca
     atgctt
181 gactgcttgt cacttttgga tcttagagag tggcgtagct tgattggggg ttgcattacc
241 accaaggagc tgggaactgt catgcgttcc ctggggcaga atcccactga ggcagagctt
301 caagacatga tcaatgaggt ggatgctgac ggcaatggaa caattgattt ccctgaattc
361 ctcaacctta tggcccgcaa gatgaaggac actgattctg aggaagaact caaggaggca
421 ttccgtgtgt ttgacaagga tcaaaatggt tttatctctg ctgctgaact gcgccatgtc
481 atgaccaacc ttggtgagaa gttgactgat gaggaggttg acgagatggt ccgtgaggct
541 gatgttgatg gtgatggcca gatcaactat gatgaatttg ttaaagtcat gatggccaag
601 taa
gttgcat taccacctga gggaagcttc agtaatcagg ccaaaatatt acctatccag
661 gtgccatttt gtgagatggc tatcgtatta aaccgaaaac aatataacac tgtgctgtgt
721 catactccct ccgttccaaa atatagtgcg cccgcgcttc cggaggtcca actttgacca
781 taaatttaac caatgagacc aactgcggcg ggagaaaaaa ttatataatt gaaaacttct
841 ttcgaatacg aattcactga tataattttt gcttccgccg caatcggtct tggtagttaa
901 atttacggtc aaagttgaag cacgtggata gaggaagcac tacattatgg aatggaggga
961 gtatgttgta ggcaatgatt gtttgccttg aagattttat agatcctgct ctggtctttc
1021 tgattgtgtc tgttcctttt ttttatgttt ggttcgtttc aacttttcaa gagtgtagcc 1081 acaatgtgtt aatgaataac tatatgtcag tgttccatga ttgca
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wangtengxu

木虫 (正式写手)

正链引物:5'  GTTCTCGGTTTTGAGGGAT  3'
负链引物:5'  TCAGAAAGACCAGAGCAGG  3'
(仅供参考)
想和有趣的人一起做有趣的事。
2楼2009-04-01 22:58:02
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sjzliuwei

新虫 (初入文坛)

谢谢你啊
3楼2009-04-02 10:53:22
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zxx0914

金虫 (小有名气)

引物怎么设计啊?从前多少个碱基开始啊?能四个AAAA一起?
4楼2009-04-03 21:14:48
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