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求助：请高手帮忙设计PCR引物
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求助：PCR引物 我有一序列用于做原核表达，但总扩增不出目的片段求教高手设计引物。我之前用的是BamH1和Hand3双酶切，PET28a表达载体！感谢感谢！！！ 序列见下，179位atg为起始密码子601位taa为终止密码子 1 cttgatctgt ttgctttgtc agtattggtt aacgagcgac caggaactat ctgttggatc 61 gttctcggtt ttgagggatc gcggatcccg attcctggtc tgcacgcctt ccttttgaat 121 ccccatctat tgtgatttct tgagatccgt ttggagtcta cggacctgcc ggca atgctt 181 gactgcttgt cacttttgga tcttagagag tggcgtagct tgattggggg ttgcattacc 241 accaaggagc tgggaactgt catgcgttcc ctggggcaga atcccactga ggcagagctt 301 caagacatga tcaatgaggt ggatgctgac ggcaatggaa caattgattt ccctgaattc 361 ctcaacctta tggcccgcaa gatgaaggac actgattctg aggaagaact caaggaggca 421 ttccgtgtgt ttgacaagga tcaaaatggt tttatctctg ctgctgaact gcgccatgtc 481 atgaccaacc ttggtgagaa gttgactgat gaggaggttg acgagatggt ccgtgaggct 541 gatgttgatg gtgatggcca gatcaactat gatgaatttg ttaaagtcat gatggccaag 601 taa gttgcat taccacctga gggaagcttc agtaatcagg ccaaaatatt acctatccag 661 gtgccatttt gtgagatggc tatcgtatta aaccgaaaac aatataacac tgtgctgtgt 721 catactccct ccgttccaaa atatagtgcg cccgcgcttc cggaggtcca actttgacca 781 taaatttaac caatgagacc aactgcggcg ggagaaaaaa ttatataatt gaaaacttct 841 ttcgaatacg aattcactga tataattttt gcttccgccg caatcggtct tggtagttaa 901 atttacggtc aaagttgaag cacgtggata gaggaagcac tacattatgg aatggaggga 961 gtatgttgta ggcaatgatt gtttgccttg aagattttat agatcctgct ctggtctttc 1021 tgattgtgtc tgttcctttt ttttatgttt ggttcgtttc aacttttcaa gagtgtagcc 1081 acaatgtgtt aatgaataac tatatgtcag tgttccatga ttgca |
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