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hqqwdm

新虫 (正式写手)

[交流] Ni-NTA纯化后 保存 蛋白变性?

我用Ni-NTA纯化目的蛋白,用250 mM 咪唑,300 mM NaCl, 50 mM 磷酸钠溶液洗脱回收目的蛋白。
将目的蛋白 保存在上述的elution buffer里,并放-20℃冰箱短暂保存;过了两天之后,发现溶液底部有较多的絮状物,请问是蛋白变性了吗?
目标蛋白的PI 约为7.25左右,elution buffer的pH值为8.0。

另外,纯化后的蛋白是否应该立即更换buffer,不能按照上述操作进行?
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hqqwdm

新虫 (正式写手)

自己顶,希望牛人解答
2楼2018-08-07 09:28:42
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banmaoyao

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我感觉可能是你的蛋白变性了。我们的样品保存在500mM咪唑中,4度保存问题不大。但是冻起来就会降解,目前还在寻找合适的稳定剂
3楼2018-08-08 11:06:00
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hc-material

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
洗脱后变更缓冲液,或者可尝试加入20%的甘油,试试
4楼2018-08-10 13:10:33
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LingniuY

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到过这样的情况,后面加了10%的甘油就没有沉淀了
5楼2018-08-29 20:30:18
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