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fykxy_206木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助】求实时定量PCR（RT-PCR）的详细步骤
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各位虫友，本人现在想做特定基因的RT-PCR，不知道具体的操作步骤。 现在我处于迷茫之中，谁能够从基础的开始给我讲讲如何做呢？我要的mRNA的全序列我已经查到了。如下： 1 atggcaggct caacagaatt tgtggtaaga agcttagaga gagtgatggt ggctccaagc 61 cagccatcgc ccaaagcttt cctgcagctc tccacccttg acaatctacc aggggtgaga 121 gaaaacattt ttaacacctt gttagtctac aatgcctcag acagagtttc tgcagatcct 181 gcaaaagtaa ttcggcaggc tctctccaag gtgttggtgt actattcccc ttttgcaggg 241 cgtctcagga aaaaagaaaa tggggatctt gaagtggagt gcacagggga gggtgctctg 301 tttgtggaag ccatggctga cactgacctc tcagtcttag gagatttgga tgactacagt 361 ccttcacatg agcaactact tttttgtctt ccacctgata cagatattga ggacatccat 421 cctctggtgg ttcaggtaac tcgttttaca tgtggaggtt ttgttgtggg gatgagtttc 481 tgccatggta tatgtgatgg actaggagca ggccagtttc ttatagcgat gggagagatg 541 gcaaggggag agattaagcc ctcctcggag ccaatatgga agagagaatt gctgaagccg 601 gaagaccctt tataccggtt ccagtattat cactttcgat tgattcgccc gccttcgaca 661 ttcgggaaaa tagttcaagg atctcttgtt ataacatctg agacaataaa ttgtatcaaa 721 caatgcctta gggaagaaag taaagaattt tgctctgcgt tcgaagttgt atctgcattg 781 gcttggatag caaggacgag ggctcttcaa attccacata gtgagaatgt gaagcttatt 841 tttgcaatgg acatgaggaa attatttaat ccgccacttt cgaagggata ctacggtaat 901 tttgttggta ccgtatgtgc aatggataat gtcaaggacc tattaagtgg atctcttttg 961 cgtgttgtaa ggattataaa gaaagcaaag gtctctttaa atgagcattt cacgtcaaca 1021 atcgtgacac cccgttctgg atcagatgag agtgtgaatt atgaaaacat tgttggattt 1081 ggcgatcgaa ggcgattggg atttgatgaa gtagattttg ggtggggaca tgcagataat 1141 gtaagtctcg tgcaacatgg attgaaggat gtttcagtcg tgcaaagtta ttttcttttc 1201 atacgacctc ccaagaataa ccccgatgga atcaagatcc tatcgttcat gcccccgtca 1261 atagtgaaat ccttcaaatt tgaaatggaa accatgacaa acaaatatgt aactaaacct 1321 tag 我想要详细的实验操作过程，从真菌的破壁开始。 今天我们老师说要我设计什么引物，我不明白。望虫友帮忙，一定重金酬谢！ 做过RT-PCR的高手留下QQ号码好吗？我还有很多问题不明白，希望得到你们的帮助。迷茫中的小弟，渴望得到你们的指教。提供详细操作过程者万分感谢！ 先放50金币吧，可以追加！ |
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sutao1979
木虫 (著名写手)
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fykxy_206(金币+10,VIP+0):先给你10个吧，能留下你的qq吗？要不你加我吧，284584508 注明小木虫哦！ 4-1 20:01
fykxy_206(金币+10,VIP+0):先给你10个吧，能留下你的qq吗？要不你加我吧，284584508 注明小木虫哦！ 4-1 20:01
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你应当找的CDS序列，用来设计引物，然后，提RNA(mRNA),反转录之后（oligodT作为反转录的引物），成为模板cDNA，然后就可以扩增了，这些都是一样的 选择一个reference gene（housekeeping gene）和control（一般是cDNAMIX）,然后就是做standard curve，和待测处理样品在同一个plate操作 简单的说就是这些，具体的有时间再和你交流吧 |
2楼2009-04-01 18:00:14
hulqi
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3楼2009-04-01 23:10:04