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FLOW-FISH技术结合检测的定细菌群落多样性问题
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流式细胞仪和FISH实验结合检测的定细菌群落多样性问题。 本人对FLOW-FISH技术刚接触不就由以上问题请教高手如下： 1；一般FISH实验都要先用多聚甲醛或其他固定剂固定细胞，目的是固定细胞的形态或是细胞膜的通透性改变使寡核苷酸探针更加容易进入细胞和目的基因结合。我的问题是多聚甲醛是交联固定剂能使细胞膜通透性改变么？能破洞吗？为何不用破洞剂而用多聚甲醛，难道多聚甲醛既有固定剂又有破洞效果？ 2；本人想设计一个实验，用FLOW-FISH想区分死菌和活菌中---特定细菌（比如氨氧化细菌）的死活比例。这就不得不说细胞固定的问题，个人感觉我的这个实验预处理就不能固定剂了，因为固定剂会杀死细胞， 这样PI（碘化丙啶）就会把细胞染成红色，不能区分死活细胞。然而不用固定剂，细胞的通透性如果不增加，寡核苷酸探针（针对氨氧化细菌的）是否有膜渗透性？是否能自由进入细胞？  啰啰嗦嗦一大堆希望有高手给与专业的解答，小白再次感谢！ |
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