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summerdayl新虫 (初入文坛)
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转基因油菜总失败
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| 想把一个烟草的基因在油菜中过表达,但是在转化的步骤一直失败。用的是农杆菌转化,用的外植体是子叶。在之前已经测试过,各个阶段培养基的比配是适宜植物生长的。转染的过程如下,1.在LB液体培养基中养菌到OD0.8-1.0; 2.把菌液离心重悬在MS液体培养基中,调整到OD0.05-0.1;3.加入AS 4.将已经预配养72h的子叶(有伤口)放在菌液中侵染30min 4.黑暗条件下共培养48h 5.转入愈伤组织诱导培养基(有Carbenicillin 500mg/l)6.一周之后,转入选择培养基(Carbenicillin 500mg/l hygromycin25mg/L)。植物到选择培养基中大概一周左右就逐渐的死了,大部分变黄萎蔫,极少一株或者两株能长出一小片叶子,但是再过几天就变黄死掉。我以为是Hygromycin的浓度太高,后面减少至12mg/l,还是相同的情况,不知道问题出在哪。 |
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