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summerdayl新虫 (初入文坛)
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[交流]
转基因油菜总失败
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| 想把一个烟草的基因在油菜中过表达，但是在转化的步骤一直失败。用的是农杆菌转化，用的外植体是子叶。在之前已经测试过，各个阶段培养基的比配是适宜植物生长的。转染的过程如下，1.在LB液体培养基中养菌到OD0.8-1.0; 2.把菌液离心重悬在MS液体培养基中，调整到OD0.05-0.1；3.加入AS 4.将已经预配养72h的子叶（有伤口）放在菌液中侵染30min 4.黑暗条件下共培养48h 5.转入愈伤组织诱导培养基（有Carbenicillin 500mg/l）6.一周之后，转入选择培养基（Carbenicillin 500mg/l hygromycin25mg/L）。植物到选择培养基中大概一周左右就逐渐的死了，大部分变黄萎蔫，极少一株或者两株能长出一小片叶子，但是再过几天就变黄死掉。我以为是Hygromycin的浓度太高，后面减少至12mg/l，还是相同的情况，不知道问题出在哪。 |
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