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hyyws木虫 (正式写手)
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[交流]
求基因敲除实验方法
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刚进入一个新的课题，要求做基因敲除方面的实验，要敲除的菌为乳杆菌，国内基本没有报道，国外仅有几篇文献，（我是指有关敲除方面的报道）。以前从没接触过，看了些敲除的文献，有些云里雾里飘了。有很多疑惑，希望高手们能帮忙解答。小女子在此谢过！ 1.我想用同源交换的方法进行试验，对于质粒应该怎么选择呢？一定要构建乳杆菌-大肠杆菌穿梭质粒吗？ 2.我随意用个质粒，比如说pUC19，我将目的基因的上下游同源臂构建进去，中间插入个筛选标记，线性化质粒后是否能整合至染色体DNA上呢？ 3.好像还存在质粒消除的问题，如果是线性化质粒整合是不是就不存在消除的问题呢？ 问题好多啊，好乱啊！希望有高手指点！ |
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