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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建m13e重组载体
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翟毛毛77

新虫 (初入文坛)
已领完
构建m13e重组载体
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大神，不知过了这么几年你还在不在，我最近在构建M13ke的重组载体，遇到了问题，想在pIII上插一段序列，酶切总感觉不彻底，因为到后来转化的时候，蓝斑很多，测序都不是我要的，出现了自连现象，我的目的片段没有连上，我也曾尝试过，过夜4度切，37度3h切，37度15分钟。最后说一下我的目的片段大约为20个氨基酸，求大神指导。

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1楼 2018-07-14 08:30:04
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macgray11

禁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
渊博震天: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-07-25 09:30:03
本帖内容被屏蔽
7楼2018-07-17 09:23:55
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翟毛毛77

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by macgray11 at 2018-07-17 09:23:55
楼主用的是什么酶切的，也有可能需要重新制备载体，或者换一个公司的酶重切一下。

我是用的neb的酶，但总是出现自连现象，过夜酶切也试了

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8楼2018-07-25 07:35:07
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hdchina20102楼
2018-07-14 08:30   回复  
翟毛毛77(金币+1): 谢谢参与
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nupeyo0073楼
2018-07-14 08:30   回复  
翟毛毛77(金币+1): 谢谢参与
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136773947484楼
2018-07-14 08:30   回复  
翟毛毛77(金币+1): 谢谢参与
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yuguanggui5楼
2018-07-14 08:30   回复  
翟毛毛77(金币+1): 谢谢参与
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曹寅大夫6楼
2018-07-14 08:30   回复  
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