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构建m13e重组载体
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翟毛毛77
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大神,不知过了这么几年你还在不在,我最近在构建M13ke的重组载体,遇到了问题,想在pIII上插一段序列,酶切总感觉不彻底,因为到后来转化的时候,蓝斑很多,测序都不是我要的,出现了自连现象,我的目的片段没有连上,我也曾尝试过,过夜4度切,37度3h切,37度15分钟。最后说一下我的目的片段大约为20个氨基酸,求大神指导。
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macgray11
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2018-07-17 09:23:55
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翟毛毛77
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7楼
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Originally posted by
macgray11
at 2018-07-17 09:23:55
楼主用的是什么酶切的,也有可能需要重新制备载体,或者换一个公司的酶重切一下。
我是用的neb的酶,但总是出现自连现象,过夜酶切也试了
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8楼
2018-07-25 07:35:07
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hdchina2010
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nupeyo007
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yuguanggui
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曹寅大夫
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