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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 新手小白刚开始做WB遇到问题
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13937923754

新虫 (初入文坛)

[交流] 新手小白刚开始做WB遇到问题 已有1人参与

刚开始做wb，用的有色marker，转膜温度有些高，冰水浴控制不住，但nc膜上有marker，一抗用生工买的封闭液稀释，二抗用pbst稀释的，封闭室温摇2个小时，4度过夜孵育一抗，然后二抗室温摇一个小时，最后用美仑的飞克特超敏ECL发光液，因为没有合适的成像一直选用的胶片曝光，但有个师兄说，如果ECL发光液没有肉眼可见荧光，就没有必要再浪费胶片了。做了好多次确实没有肉眼可见荧光。
求大神指导一下过程有没有什么问题，还有就是膜孵育完ECL发光液到底有无肉眼可见荧光，有用过同牌子发光液的小伙伴告知我一下，不胜感激
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1楼 2018-07-08 13:22:07
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13937923754

新虫 (初入文坛)
自己顶一下
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2楼2018-07-08 13:29:15
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13937923754

新虫 (初入文坛)
求大家帮我看一下，我感觉毕不了业了

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3楼2018-07-08 16:14:04
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luckydog52

木虫 (著名写手)
还真没注意肉眼能不能看。不过胶片比较敏感，即使肉眼看不清，你可以延长曝光时间，也能看到

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自信源于一次次成功的积累
4楼2018-07-08 21:35:19
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13937923754

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by luckydog52 at 2018-07-08 21:35:19
还真没注意肉眼能不能看。不过胶片比较敏感，即使肉眼看不清，你可以延长曝光时间，也能看到

不是这个意思，是把膜浸在ecl发光液里面，如果一段时间后nc膜上没有出现可见荧光是不是就说明实验失败了，也就没必要进行后面的曝光了

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5楼2018-07-08 22:05:11
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luckydog52

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 13937923754 at 2018-07-08 22:05:11
不是这个意思，是把膜浸在ecl发光液里面，如果一段时间后nc膜上没有出现可见荧光是不是就说明实验失败了，也就没必要进行后面的曝光了
...

肉眼看不见发光也应曝光，最后有没有条带不是用眼睛可见判断的。不曝光你前面用的材料都浪费了
没有必要省胶片

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自信源于一次次成功的积累
6楼2018-07-08 23:30:25
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