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银虫 (正式写手)

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[求助] 内切木聚糖酶活测定

小女子初始接触生物酶这一块儿，测定内外低聚木糖酶活时遇到一些小bug。谢谢给位帮解一下。测定方法是从网上下载的，然后初始配置的酶液浓度为2%左右，底物用的是木聚糖，然后以不同稀释倍数的酶液进行吸光值测定，发现，1000/5000/5500/6000/8000/10000倍的稀释倍数下都测不出吸光值。要不就是空白样吸光值太高无法调零，要不就是空白样吸光值可以调零，但是同等稀释倍数下的样品吸光值太小，不在测定范围内。我在想是不是空白样有问题做的，（附件中有具体的）方法如下：

木聚酶活力测定
取15 ml具塞刻度试管按下面的反应顺序进行操作,在反应过程中,从加入底物(吸取前摇匀) (4.5)开始,向每支试管中加入试剂的时间间隔要绝对一致, 50℃水解10 min.
反应步骤及试剂、溶液用量见下表:
试样                               空白
1.加底物(4.5)1.8ml 1.加底物(4.5)1.8ml
2.50℃预热3min 2.50℃预热3min
3.加酶液0.2ml 3. 50℃水解10 min
4.混合 4. 加DNS试剂3 ml
5.50℃水解10 min 5. 混合
6.加DNS试剂3 ml 6. 加酶液0.2 ml
7.混合 7.混合
8.沸水浴中10 min 8.沸水浴中10 min
9.冷却定容至15 ml 9.冷却定容至15 ml
10.空白调零540nm下测定 10.空白调零540nm下测定

7. 酶活力单位计算
酶活力＝(S×D×1000)/（0.2×10）×1.7  μg/ml(g).min
式中：
S—测得光吸收在标准曲线上对应的木糖量，mg数；
D—酶液或酶粉稀释倍数；
1000— mg和μg之间的换算系数；
0.2—测定所取酶液量，ml数；
10—反应时间，min数；
1.7—方法换算系数。
8. 酶活力单位定义及换算
8.1  本方法酶活定义:在本测定条件下，每分钟水解木聚糖产生1μg还原糖（以木糖计）所需酶量定义为一个酶活力单位（u）。
国际酶活单位的定义:在测定条件下,每分钟水解木聚糖产生1μmol还原糖（以木糖计）所需酶量定义为一个酶活力单位（IU）。
8.2  u与国际单位IU 的换算关系：
1 u＝1÷150 IU（μmol糖/ml(g).min）
150: 木糖的分子量

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