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w在念你0银虫 (正式写手)
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内切木聚糖酶活测定
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小女子初始接触生物酶这一块儿，测定内外低聚木糖酶活时遇到一些小bug。谢谢给位帮解一下。测定方法是从网上下载的，然后初始配置的酶液浓度为2%左右，底物用的是木聚糖，然后以不同稀释倍数的酶液进行吸光值测定，发现，1000/5000/5500/6000/8000/10000倍的稀释倍数下都测不出吸光值。要不就是空白样吸光值太高无法调零，要不就是空白样吸光值可以调零，但是同等稀释倍数下的样品吸光值太小，不在测定范围内。我在想是不是空白样有问题做的，（附件中有具体的）方法如下： 木聚酶活力测定 取15 ml具塞刻度试管按下面的反应顺序进行操作,在反应过程中,从加入底物(吸取前摇匀) (4.5)开始,向每支试管中加入试剂的时间间隔要绝对一致, 50℃水解10 min. 反应步骤及试剂、溶液用量见下表: 试样 空白 1.加底物(4.5)1.8ml 1.加底物(4.5)1.8ml 2.50℃预热3min 2.50℃预热3min 3.加酶液0.2ml 3. 50℃水解10 min 4.混合 4. 加DNS试剂3 ml 5.50℃水解10 min 5. 混合 6.加DNS试剂3 ml 6. 加酶液0.2 ml 7.混合 7.混合 8.沸水浴中10 min 8.沸水浴中10 min 9.冷却定容至15 ml 9.冷却定容至15 ml 10.空白调零540nm下测定 10.空白调零540nm下测定 7. 酶活力单位计算 酶活力＝(S×D×1000)/（0.2×10）×1.7 μg/ml(g).min 式中： S—测得光吸收在标准曲线上对应的木糖量，mg数； D—酶液或酶粉稀释倍数； 1000— mg和μg之间的换算系数； 0.2—测定所取酶液量，ml数； 10—反应时间，min数； 1.7—方法换算系数。 8. 酶活力单位定义及换算 8.1 本方法酶活定义:在本测定条件下，每分钟水解木聚糖产生1μg还原糖（以木糖计）所需酶量定义为一个酶活力单位（u）。 国际酶活单位的定义:在测定条件下,每分钟水解木聚糖产生1μmol还原糖（以木糖计）所需酶量定义为一个酶活力单位（IU）。 8.2 u与国际单位IU 的换算关系： 1 u＝1÷150 IU（μmol糖/ml(g).min） 150: 木糖的分子量 |
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本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 木聚糖酶测定方法.docx
2018-07-07 11:11:20, 17.99 K
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