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峰烟征途

新虫 (初入文坛)

[求助] 金黄色葡萄球菌质粒提取 已有2人参与

在用qiagen试剂盒提取野生型金黄色葡萄球菌的质粒,都没提取出来,不知道哪出问题了,求大神指导啊!
流程:加过P1后,也加入了溶葡球菌酶,根据酶解后的现象,也破了壁了,加过P2后,蓝色总是混的不均匀,好像是P2没有和溶解后的菌液混匀,菌液就好像一个胶状的球,P2溶不进去,但是,要想混匀得剧烈的颠倒才能行啊,说明书上不让剧烈颠倒啊,然后就接着往下做了,洗杂质的时候柱子还堵了,最后洗脱下来的溶液加过异丙醇,啥沉淀都没有,求大神指导啊

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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

裂解不充分,金黄葡萄球菌不是一般的难裂解,你看P2混不匀,应该还是没有破壁,你破壁条件是什么?
2楼2018-08-20 08:53:31
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

技巧1,溶葡菌素,需要37度孵育一会,一般是10-20分钟,然后会发现菌液变清了,说明溶解了。
技巧2,你没有安说明书要求做,菌液浓度太高了。才会堵膜,由此导致大量的核酸不能滤过
3楼2018-08-20 09:08:53
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