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有关实验室纯培养后测量细菌数量的问题 已有2人参与
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实验目的是测试新仪器探测Ecoli的时间跟精准度，然后导师需要我做的是一个类似于平行实验以确定机器对大肠杆菌测量数据的精准性。机器操作十分简单，就是用磷酸缓冲液对高浓度细菌进行稀释后放入机器即可。但对于传统的技术方法，即同时使用平板基数跟OD值的测量，这两种方法是如何结合起来的？为什么OD值的测量就是取1mL的高浓度细菌加入液体培养基，在充分混合后首先测量空白组（即只有液体培养基）的OD值，再测量混合了1ml细菌的培养基OD值并将其放入37度恒温震荡混合器中培养，每隔一个小时取样并使用仪器测其od值，这样做的意义是什么？24H之后还需要进行什么进一步操作吗？与此同时，在含有1mL的液体培养基制备好之后，立即取1mL混合液在48孔板上进行系列的十倍稀释，为何此时浓度就是从10的负一次方开始了？而且就算最后平板计数算出了数量，怎么和OD的方法进行统一？ 可能我说的东西比较碎片，希望有大神帮我整理一下，给我提供一个清晰的思路，谢谢 跪求  |
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3楼2018-07-05 14:01:48
younx
至尊木虫 (著名写手)
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【答案】应助回帖
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简单点说就是用最常用的平皿法和仪器对比，看看仪器准确度如何 仪器检测菌液可以不用稀释，在测完空白溶液的OD值后测试菌液的OD值，目的是消除溶液的误差，此时会有一个数值，在此数值下在仪器测试，同时对此浓度下的菌液10倍的梯度稀释，使用平皿法进行培养，根据稀释浓度反推菌液浓度，得到的数值与仪器测量值比对，以检查准确度、精密度、重现性、检测限等等 至于24小时后，OD值可能变化就不大了，可以根据菌培养的生长曲线，自定义一个检测时间，在生长期可以将取样次数加密 10的负一次方，就是将菌液稀释10倍，负二次方就是稀释100倍，以此类推 |
2楼2018-07-05 11:17:41
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至尊木虫 (著名写手)
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根据你的描述每隔一小时取样测OD，推测应该是测菌的生长曲线，应该是你把菌加入到培养基之后，开始测0点的OD值，同时测空白培养基的OD值(这个应该是0或很小的值，忽略不计的)，然后每小时或半小时一次取样测试，同时做平皿法确认一下，24小时之后，也许用不上24小时，OD值就没什么变化了，因为菌量太多太多了，死菌活菌混杂在一起测没有什么意义，我的理解是这样，或者你还需要做一下染色看看死菌活菌的比例 发自小木虫Android客户端 |
4楼2018-07-08 13:32:49
5楼2018-07-09 19:05:10
