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finding1371

银虫 (小有名气)

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[交流] 原核表达设对照

我做的是原核表达，有个小问题求助大家，就是重组子导入大肠杆菌DE3，做SDS-PAGE分析，我怎么设对照，哪些加IPTG,哪些不加IPTG.有人说含重组子的一个样加IPTG,一个不加IPTG,含空载体的也是一个加，一个不加，然后原来的DE3也是这样，到底怎么设啊，有这复杂吗？另外我想问下，空载体导入DE3中后做SDS-PAGE，出现的条带和DE3本身跑出来的条带应该一致吧，只是重组子表达了才会有差异啊，先谢谢了！

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1楼 2009-03-29 09:58:48

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黑罕

金虫 (小有名气)

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我的做法是重组子的一个样加IPTG,一个不加IPTG。
其他的不设
最多再设16度诱导和36度诱导
空载体导入DE3中后做SDS-PAGE，出现的条带和DE3本身跑出来的条带是一致，只是重组子表达了才会有差异。

[ Last edited by 黑罕 on 2009-3-29 at 13:14 ]

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2楼2009-03-29 10:02:51

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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实验涉及的每一个因子都需要为之做一个非相关或者空白对照
多个因子这涉及正交
当然有些双空白可以不用做
这里就是两个因子：重组子与诱导剂
那么各设一个空白再正交
当然，空质粒+不加诱导剂就可做可不做
除非你的实验结果很诡异，比如出现很多非特异的东西，那么这个双空就有必要做

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3楼2009-03-29 10:04:42

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