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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 半定量和定量pcr结果比较
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ls_2018

新虫 (小有名气)

[求助] 半定量和定量pcr结果比较 已有2人参与

我把定量pcr的样又跑了个半定量，发现之前ct值一个是19.5的，一个是31的，在跑普通琼脂糖的时候亮度看起来差不多。而且ct值较高的几个样品反而跑出来的带有点点糊，各位有遇到类似的情况吗？是怎么回事呢？哪个结果可信度更高呢，谢谢哈
还有引物二聚体的溶解度曲线的峰值大概落在多少度啊？120左右的产物大概落在多少度呢？
再谢谢～

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2018-07-02 21:22:35
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嗯，这就是我

新虫 (小有名气)
占楼看结果

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2楼2018-07-02 23:03:35
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
定量PCR是用来检测初始量。你PCR程序跑完的终量（你胶上看到的）并没有意义。ct值才是你需要关注的
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
3楼2018-07-03 00:48:18
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2019-02-13 20:38:31
定量PCR是全程监控PCR扩增的变化,并且能够同管家基因的扩增曲线进行相对定量,而将基因的表达量数值化,准确度高于半定量RT-PCR.半定量RT-PCR因为是监控的最终产物,而在基因表达水平很高的时候,PCR体系很可能在反应中后期就饱和了,所以对于高水平表达的基因来说,用半定量RT-PCR并不能很准确的说明问题.半定量RT-PCR可以作为辅助证明荧光定量PCR的结果，我们实验室打算将提取小鼠血样中的DNA做后续的BIODAI SYBR Green 荧光定量PCR检测目标DNA，楼主问到的引物二聚体的溶解度曲线的峰值大概落90度左右
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4楼2019-01-30 15:22:03
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