24小时热门版块排行榜    

查看: 1058  |  回复: 16
当前主题已经存档。

w.king124

金虫 (正式写手)


[交流] 有效保存感受态细胞的方法?

1月13号制备的感受态细胞,昨天用效果很不好,对照长的菌落很少,连接产物根本就没有菌落,难道是保存方法有问题?
我是在1.6ml感受态细胞中加了200ul80%甘油,再200ul分装,-82摄氏度保存
才两个月就不能用了?
各位你们都怎么保存的呢??

[ Last edited by w.king124 on 2009-3-29 at 11:09 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mixy

铜虫 (初入文坛)


reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-1 22:04
做个正对照试试呗
2楼2009-03-29 01:36:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)


做了啊,没长几个菌落
3楼2009-03-29 11:07:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)


没人知道吗
4楼2009-03-29 16:34:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dengyougu

木虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-1 22:05
据我所知,感受态细胞需置于-70摄氏度环境保存。
5楼2009-03-29 17:29:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-1 22:05
按理两个月不是很长,但是,感受态里问题太多了,一种状态是蛋白质结构和活性的体现,理论上低温可以保持蛋白质的状态,这是低温保持感受态的理论基础,但是,感受态出问题,没有菌落的原因太多了,这是生物试验的特点,所以不必考虑了,借一支转化自己的产物试试,连接是否正常,操作手法是否正常,········
6楼2009-03-29 17:36:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by annwt at 2009-3-29 17:36:
按理两个月不是很长,但是,感受态里问题太多了,一种状态是蛋白质结构和活性的体现,理论上低温可以保持蛋白质的状态,这是低温保持感受态的理论基础,但是,感受态出问题,没有菌落的原因太多了,这是生物试验的 ...

正准备重整旗鼓,再做一遍
7楼2009-03-29 21:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mofatuzi

新虫 (小有名气)


reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-1 22:05
是不是离心管没洗干净?感受态细胞对赃物和洗涤剂都很敏感,有一点就会影响效率,所以一定要洗干净,用ddw涮洗干净,然后烘干灭菌。
8楼2009-03-29 21:34:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by mofatuzi at 2009-3-29 21:34:
是不是离心管没洗干净?感受态细胞对赃物和洗涤剂都很敏感,有一点就会影响效率,所以一定要洗干净,用ddw涮洗干净,然后烘干灭菌。

当时做了一次转化,效果很好,但是存起来的就这样
9楼2009-03-31 19:42:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hulqi

金虫 (正式写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-1 22:05
甘油对菌的生长有抑制作用,取出离心需要去除甘油。另外保藏菌种甘油用30%的浓度。
10楼2009-03-31 20:15:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 w.king124 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见