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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有效保存感受态细胞的方法？
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w.king124

金虫 (正式写手)

[交流] 有效保存感受态细胞的方法？

1月13号制备的感受态细胞，昨天用效果很不好，对照长的菌落很少，连接产物根本就没有菌落，难道是保存方法有问题？
我是在1.6ml感受态细胞中加了200ul80%甘油，再200ul分装，-82摄氏度保存
才两个月就不能用了？
各位你们都怎么保存的呢？？

[ Last edited by w.king124 on 2009-3-29 at 11:09 ]
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1楼 2009-03-28 22:58:07
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mixy

铜虫 (初入文坛)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-1 22:04
做个正对照试试呗
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2楼2009-03-29 01:36:59
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w.king124

金虫 (正式写手)
做了啊，没长几个菌落
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3楼2009-03-29 11:07:49
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w.king124

金虫 (正式写手)
没人知道吗
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4楼2009-03-29 16:34:18
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dengyougu

木虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-1 22:05
据我所知，感受态细胞需置于-70摄氏度环境保存。
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5楼2009-03-29 17:29:49
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annwt

木虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-1 22:05
按理两个月不是很长，但是，感受态里问题太多了，一种状态是蛋白质结构和活性的体现，理论上低温可以保持蛋白质的状态，这是低温保持感受态的理论基础，但是，感受态出问题，没有菌落的原因太多了，这是生物试验的特点，所以不必考虑了，借一支转化自己的产物试试，连接是否正常，操作手法是否正常，········
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6楼2009-03-29 17:36:14
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by annwt at 2009-3-29 17:36:
按理两个月不是很长，但是，感受态里问题太多了，一种状态是蛋白质结构和活性的体现，理论上低温可以保持蛋白质的状态，这是低温保持感受态的理论基础，但是，感受态出问题，没有菌落的原因太多了，这是生物试验的 ...

正准备重整旗鼓，再做一遍
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7楼2009-03-29 21:24:32
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mofatuzi

新虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-1 22:05
是不是离心管没洗干净？感受态细胞对赃物和洗涤剂都很敏感，有一点就会影响效率，所以一定要洗干净，用ddw涮洗干净，然后烘干灭菌。
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8楼2009-03-29 21:34:05
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by mofatuzi at 2009-3-29 21:34:
是不是离心管没洗干净？感受态细胞对赃物和洗涤剂都很敏感，有一点就会影响效率，所以一定要洗干净，用ddw涮洗干净，然后烘干灭菌。

当时做了一次转化，效果很好，但是存起来的就这样
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9楼2009-03-31 19:42:18
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hulqi

金虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖 4-1 22:05
甘油对菌的生长有抑制作用，取出离心需要去除甘油。另外保藏菌种甘油用30%的浓度。
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10楼2009-03-31 20:15:29
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