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mayju爱地球

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问哪里能拍TEM带EDX/mapping,并且负责细菌制样 已有1人参与

求助大家,哪里可以拍TEM带EDX/mapping,并且负责细菌制样。。

我的样本是大肠杆菌,表面和菌内有纳米材料,想通过TEM拍细菌形态,完整性,并通过EDX/mapping给纳米材料定性

穷,只能悬赏5个金币,但是诚意满满,求助~
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gxytju2008

专家顾问 (文坛精英)

自己做固定和脱水就可以,这东西寄过去制样不靠谱。。

发自小木虫Android客户端
2楼2018-06-27 15:01:46
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普通回帖

mayju爱地球

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gxytju2008 at 2018-06-27 15:01:46
自己做固定和脱水就可以,这东西寄过去制样不靠谱。。

首先感谢回复啊

其次我查了一下生物样本的制样方法:
一.取材:
组织块小于1立方毫米
二.固定:        
2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次
1%锇酸固定液固定                2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次
三.脱水:        
50%乙醇                        15-20分
70%乙醇                        15-20分
90%乙醇                        15-20分
90%乙醇 90%丙酮(1:1)        15-20分
90%丙酮                        15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮           室温                 15-20分三次
四.包埋:        
纯丙酮+包埋液(2:1)室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液(1:2)室温 过夜
纯包埋液                   37度 2-3小时
五.固化:        
37度烘箱内                 过夜
45度烘箱内                 12小时
60度烘箱内                 24小时
六.超薄切片机切片 50-60 nm
七.3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八.透射电镜观察。

感觉自己完全做不来,尤其是没有超博切片机,而且感觉手法技术要求很高。
你的意思是不用后面的步骤,自己做到固定和脱水就可以了?我就是想问大肠感觉到底应该怎么制样?
谢谢谢谢
3楼2018-06-27 15:08:54
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mayju爱地球

新虫 (初入文坛)

有两个问题,一个就是拍TEM的大肠杆菌如何制样?
第二个就是,我们学校材料学院有TEM带MAPPING/EDX,但是是不是拍材料和拍细菌电压不一样,不太合适啊?
是不是得找专门拍细菌(生物)的TEM带MAPPING/EDX,这样才电压合适,听说电压太高会打穿什么的
4楼2018-06-27 15:12:33
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gxytju2008

专家顾问 (文坛精英)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mayju爱地球 at 2018-06-27 15:08:54
首先感谢回复啊

其次我查了一下生物样本的制样方法:
一.取材:
组织块小于1立方毫米
二.固定:        
2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂 ...

光看表观形貌不用切片。。要看里面的细胞器结构是要切片的
5楼2018-06-27 15:35:47
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gxytju2008

专家顾问 (文坛精英)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mayju爱地球 at 2018-06-27 15:12:33
有两个问题,一个就是拍TEM的大肠杆菌如何制样?
第二个就是,我们学校材料学院有TEM带MAPPING/EDX,但是是不是拍材料和拍细菌电压不一样,不太合适啊?
是不是得找专门拍细菌(生物)的TEM带MAPPING/EDX,这样才 ...

没这些问题,固定以后和一般的样品一样做就行,很稳定的其实
6楼2018-06-27 15:36:24
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mayju爱地球

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by gxytju2008 at 2018-06-27 15:36:24
没这些问题,固定以后和一般的样品一样做就行,很稳定的其实...

感谢回复

所以你的意思是自己做了固定就可以去任何TEM带mapping/edx的都可以拍了?

另外固定是下面的步骤吗?
固定:        
2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次
1%锇酸固定液固定                2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次

感谢
7楼2018-06-27 16:43:34
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mayju爱地球

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gxytju2008 at 2018-06-27 15:35:47
光看表观形貌不用切片。。要看里面的细胞器结构是要切片的...

我们不用看细胞器,只看一下细胞膜是否完整就可以了
8楼2018-06-27 16:46:02
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gxytju2008

专家顾问 (文坛精英)

引用回帖:
8楼: Originally posted by mayju爱地球 at 2018-06-27 16:46:02
我们不用看细胞器,只看一下细胞膜是否完整就可以了...

细胞膜比较trick,比较容易看的是细胞是不是有破损,形貌是不是有宏观变化,是不是细胞膜破还是细胞壁还是啥结构是很难确定,可以用这个方法试试

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9楼2018-06-27 16:49:19
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pcceshi9

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我这里可以拍材料的电镜。 但是生物样品的话, 拍不来呢。需要专门的生物电镜
10楼2018-06-27 17:45:14
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