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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 合成表征 » 请问哪里能拍TEM带EDX/mapping，并且负责细菌制样
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mayju爱地球

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问哪里能拍TEM带EDX/mapping，并且负责细菌制样 已有1人参与

求助大家，哪里可以拍TEM带EDX/mapping，并且负责细菌制样。。

我的样本是大肠杆菌，表面和菌内有纳米材料，想通过TEM拍细菌形态，完整性，并通过EDX/mapping给纳米材料定性。

穷，只能悬赏5个金币，但是诚意满满，求助~
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1楼 2018-06-27 15:00:10
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gxytju2008

专家顾问 (文坛精英)
自己做固定和脱水就可以，这东西寄过去制样不靠谱。。

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2楼2018-06-27 15:01:46
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mayju爱地球

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gxytju2008 at 2018-06-27 15:01:46
自己做固定和脱水就可以，这东西寄过去制样不靠谱。。

首先感谢回复啊

其次我查了一下生物样本的制样方法：
一．取材：
组织块小于1立方毫米
二．固定：        
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次
1%锇酸固定液固定                2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次
三．脱水：        
50%乙醇                        15-20分
70%乙醇                        15-20分
90%乙醇                        15-20分
90%乙醇 90%丙酮（1：1）        15-20分
90%丙酮                        15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮           室温                 15-20分三次
四．包埋：        
纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液（1：2）室温 过夜
纯包埋液                   37度 2-3小时
五．固化：        
37度烘箱内                 过夜
45度烘箱内                 12小时
60度烘箱内                 24小时
六．超薄切片机切片 50-60 nm
七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八．透射电镜观察。

感觉自己完全做不来，尤其是没有超博切片机，而且感觉手法技术要求很高。
你的意思是不用后面的步骤，自己做到固定和脱水就可以了？我就是想问大肠感觉到底应该怎么制样？
谢谢谢谢
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3楼2018-06-27 15:08:54
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mayju爱地球

新虫 (初入文坛)
有两个问题，一个就是拍TEM的大肠杆菌如何制样？
第二个就是，我们学校材料学院有TEM带MAPPING/EDX，但是是不是拍材料和拍细菌电压不一样，不太合适啊？
是不是得找专门拍细菌（生物）的TEM带MAPPING/EDX，这样才电压合适，听说电压太高会打穿什么的
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4楼2018-06-27 15:12:33
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gxytju2008

专家顾问 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mayju爱地球 at 2018-06-27 15:08:54
首先感谢回复啊

其次我查了一下生物样本的制样方法：
一．取材：
组织块小于1立方毫米
二．固定：        
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂 ...

光看表观形貌不用切片。。要看里面的细胞器结构是要切片的
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5楼2018-06-27 15:35:47
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gxytju2008

专家顾问 (文坛精英)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mayju爱地球 at 2018-06-27 15:12:33
有两个问题，一个就是拍TEM的大肠杆菌如何制样？
第二个就是，我们学校材料学院有TEM带MAPPING/EDX，但是是不是拍材料和拍细菌电压不一样，不太合适啊？
是不是得找专门拍细菌（生物）的TEM带MAPPING/EDX，这样才 ...

没这些问题，固定以后和一般的样品一样做就行，很稳定的其实
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6楼2018-06-27 15:36:24
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mayju爱地球

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gxytju2008 at 2018-06-27 15:36:24
没这些问题，固定以后和一般的样品一样做就行，很稳定的其实...

感谢回复

所以你的意思是自己做了固定就可以去任何TEM带mapping/edx的都可以拍了？

另外固定是下面的步骤吗？
固定：        
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次
1%锇酸固定液固定                2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次

感谢
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7楼2018-06-27 16:43:34
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mayju爱地球

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gxytju2008 at 2018-06-27 15:35:47
光看表观形貌不用切片。。要看里面的细胞器结构是要切片的...

我们不用看细胞器，只看一下细胞膜是否完整就可以了
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8楼2018-06-27 16:46:02
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gxytju2008

专家顾问 (文坛精英)
引用回帖:
8楼: Originally posted by mayju爱地球 at 2018-06-27 16:46:02
我们不用看细胞器，只看一下细胞膜是否完整就可以了...

细胞膜比较trick，比较容易看的是细胞是不是有破损，形貌是不是有宏观变化，是不是细胞膜破还是细胞壁还是啥结构是很难确定，可以用这个方法试试
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mayju爱地球
9楼2018-06-27 16:49:19
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pcceshi9

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我这里可以拍材料的电镜。 但是生物样品的话， 拍不来呢。需要专门的生物电镜
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10楼2018-06-27 17:45:14
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