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zhaomsy

新虫 (初入文坛)

[求助] HIS标签表达后过镍柱只能挂柱,20nm咪唑或磷酸盐洗脱就掉,求助如何进行纯化 已有2人参与

酵母表达蛋白加了his标签,跑胶证明his表达出来了,但是只能挂柱,磷酸盐或者低浓度咪唑洗脱就掉,求助如何改进纯化?谢谢大家
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2018-07-01 15:58:47
跑胶证明,是不是用WB验证过,确保his表达了,多低的咪唑会掉,掉了多少

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2楼2018-06-28 11:27:56
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★
zhaomsy(youlinglyw代发): 金币+2, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2018-07-01 15:58:53
purimag得Ni磁珠试试

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3楼2018-06-28 13:09:18
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芜意橙

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
youlinglyw: 金币+5, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2018-07-01 15:59:16
表达量还行的话,可以加长His试一下,如果表达量不高,这种方法就不行
过去的不能改变,未来的你不知道
4楼2018-07-01 14:23:05
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小豆豆海丽

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

5楼2018-09-18 21:59:37
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

结合力太弱,于很多因素有关,比如填料的质量,改用高载量的填料,柱子没平衡到位,彻底平衡,缓冲液ph太低,调到8.0左右。低浓度就能洗脱下来是好事
6楼2018-09-19 10:08:17
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小蜗牛136

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

7楼2018-10-04 02:14:59
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L_大松子

新虫 (正式写手)

我是新手,我觉得酵母体外表达蛋白挺纯的吧,要求不是太高的话我觉得可以拿个超滤管浓缩下。

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8楼2019-02-24 10:42:46
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