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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » Southern blot
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九加七

新虫 (初入文坛)
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Southern blot
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请教Southern blot，做过的大佬们帮帮忙。
我是跑S1-PFGE的胶做杂交，方法是参考文献和说明书做的。
首先先用的0.25M 的稀盐酸脱嘌呤（分子量大），再用0.4M的NaOH变性2次,再过夜转膜
用10X SSC洗一下，放在滤纸上，120度 30min固定
再用水洗一下，自然风干后，42度预杂交1h，再用杂交液过夜杂交
然后检测都是按说明书做的，拍的照却啥都没有，不知道哪里出了问题
做普通电泳出来的目的纯条带是能杂交出来条带的，就是做S1-PFGE这块胶，一直做不出来，膜上什么都没有。

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1楼2018-06-27 10:59:54
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huangqiuling

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我最近也在做Southern，结果总是阳性对照信号强，但样品的信号很弱，加大DNA酶切量，30 v电压后条带严重扭曲，郁闷！！！
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10楼2018-11-22 14:56:49
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