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考马斯亮蓝测蛋白质，硫酸苯酚法测多糖
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考马斯亮蓝测蛋白质及硫酸苯酚法测多糖诶详细步骤与方法在哪里下载，我找了国家环保部的官网上面没有，请问各位哪里有？江湖救急救急！！ 发自小木虫Android客户端 |
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deng827feng
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5楼2018-06-27 16:48:13
柳絮虫
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deng827feng
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考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量 一、 目的 学习和掌握考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量的原理和方法。 二、原理 考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488 nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595 nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2 min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 二、 材料、主要仪器和试剂 1．实验材料 新鲜绿豆芽 2．主要仪器 （1）分析天平、台式天平 （2）刻度吸管 （3）具塞试管、试管架 （4）研钵 （5）离心机、离心管 （6）烧杯、量筒 （7）微量取样器 （8）分光光度计 3．试剂 （1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100 mg牛血清白蛋白，溶于100 mL蒸馏水中，即为1 000μg／mL的原液。 （2）蛋白试剂考马斯亮蓝G-250的配制：称取100 mg考马斯亮蓝G-250，溶于50 mL 90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100 mL，最后用蒸馏水定容到1 000 mL。此溶液在常温下可放置一个月。 （3）乙醇 （4）磷酸（85％） 四、操作步骤 1．标准曲线制作 （1）0～100μg／mL标准曲线的制作：取6支10mL干净的具塞试管，按表1取样。盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min后用1cm光经的比色杯在595nm波长下比色，记录各管测定的光密度OD595nm，并做标准曲线。 表1 低浓度标准曲线制作 管 号 1 2 3 4 5 6 1 000μg／mL标准蛋白液（mL） 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 蒸馏水（mL） 1.00 0.98 0.96 0.94 0.92 0.90 考马斯亮蓝G-250试剂（mL） 5 5 5 5 5 5 蛋白质含量（μg） 0 20 40 60 80 100 OD595 （2）0～1 000μg／mL标准曲线的制作：另取6支10mL具塞试管，按表2取样。其余步骤同（1）操作，做出蛋白质浓度为0～1 000μg／mL的标准曲线。 表2 高浓度标准曲线制作 管 号 7 8 9 10 11 12 1 000μg／mL标准蛋白液（mL） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（mL） 1.00 0.8 0.6 0.4 0.2 0 考马斯亮蓝G-250试剂（mL） 5 5 5 5 5 5 蛋白质含量（μg） 0 200 400 600 800 1000 OD595nm 2．样品提取液中蛋白质浓度的测定 （1）待测样品制备：称取新鲜绿豆芽下胚轴2g放入研钵中，加2mL蒸馏水研磨成匀浆，转移到离心管中，再用6mL蒸馏水分次洗涤研钵，洗涤液收集于同一离心管中，放置0.5~1h以充分提取，然后在4 000r/min离心20min，弃去沉淀，上清液转入10mL容量瓶，并以蒸馏水定容至刻度，即得待测样品提取液。 （2）测定：另取2支10mL具塞试管，按下表取样。吸取提取液0.1mL（做一重复），放入具塞刻度试管中，加入5mL考马斯亮蓝G-250蛋白试剂，充分混合，放置2min后用1cm光径比色杯在595nm下比色，记录光密度OD595nm，并通过标准曲线查得待测样品提取液中蛋白质的含量X（μg）。以标准曲线1号试管做空白。 把x、y数据分别输入上下二行中，点击这个数据表中任一单元格，然后插入-图表，图表类型选xy散点图，子图表可任选一个自已需要的，再按提示一路下一步，最后点完成。在生成的图中右击数据线，在出现的下拉快捷菜单中点击添加趋势线，在类型中选线性（因你的方程是一次线性方程），在选项中选显示公式（还可勾选“显示R平方值，这是相关系数，表示线性程度）最后按确定，ok 了。这时在图出现的公式就是你要的回归方程。 当然，你也可不用图表的方式，可用函数LINEST，INTERCEPT来分别求出A、B值，但本人用下来这个方法最方便。 1、输入数据后，单击“图表向导”，启动“图表向导”后，选择绘制“xy散点图”； 2、完成后，执行“图表/添加趋势线/"根据散布图的线的变化趋势，结合函数图像，选择相应的线形； 3 在选项标签中，选中“显示公式”，单击确定。A，B和表达式全有了！ |
4楼2018-06-27 16:47:09