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chinatokorea铁杆木虫 (著名写手)
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[交流]
诚恳求助: 制作polyacrylamide gel (fused silica)capillary 过程中遇到的问题.
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本人最近制作polyacrylamide-gel capillary, 以其充当导体的作用, 即将已经填充好gel的capillary两端分别浸入buffer, 并apply the electric field across the capillary. 正如大家所知, 在电场的作用下, 离子可以在gel中移动, 而bulk solution则不能通过gel, 这样它就起到了导体的作用了. 本人采用的gel配方如下(化学聚合的方式): acrylamide/bisacrylamide (1)10%T 5%C (2) 5%T 5%C 共配制了两种不同溶液 APS(ammonium persulfate) TEMED (tetramethylethylenediamine) 可是在制作过程中遇到了难题, 让我摸不着头脑也很上火: 将degassed prepolymer 灌入capillary后, 无论等待多长时间(一天, 还是五天), 当我trim 毛细管两端之后, 刚刚露在外边的gel就像水挥发了似的, 很快就在两端出现了一小段空管区, 而根据我的实验要求, 这种情况是不允许的, 因为这样的话, capillary内的gel就会和capillary外的buffer围出一个bubble, 而这个bubble会在capillary通电过程中受外力作用移动, 最终破坏capillary内部的gel...... 我也试过用商用的UV诱导gel灌capillary, 可是结果还是一样....头痛呀... 希望坛子里的兄弟姐妹们, 能帮忙解决这个问题.....不胜感激...... 我想研究过capillary gel electrophoresis的同行们, 应该会知道如何解决这个问题吧......等待中..... [ Last edited by chinatokorea on 2009-3-27 at 23:11 ] |
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