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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌定量和定性检测，为什么加水也能扩出来
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西大慢慢

铁虫 (著名写手)

[交流] 菌定量和定性检测，为什么加水也能扩出来

我最近在做菌的定植和母体传播，实验是这样的给小鼠灌喂一种特异菌，然后一定时间后检测该菌在肠道的定植情况和在胎盘中的定植情况。在采用荧光定量和普通PCR检测，结果发现普通定量中，空白阴性对照（加dd水，就是PCR时不加入DNA,加去离子灭菌水）也发现有条带，荧光定量是也检测出了循环值，而且低于灌喂该种菌的小鼠中的循环值。希望大神能给点意见，为什么pcr中不加入DNA也扩增出来了该条带，引物的特异性，退火温度都检测过了，没问题，特异性都很好。望大神解答，谢谢了！

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1楼 2018-06-22 07:53:04
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西大慢慢

铁虫 (著名写手)
★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 鼓励交流 2018-11-10 15:39:32
水要换成分子级的无菌水，水中可能存在这种菌，至于动物中可能是由于引物特异性的问题。水中扩增是由于水被污染了的问题，还有就是尽量在超净台去做，因为空气也有某些菌，避免污染。

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178楼2018-11-07 14:51:05
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西大慢慢

铁虫 (著名写手)
你在超净台里试试，点上酒精灯。然后每一步都尽量避免污染，水去买那种试剂公司的，你给他说你要分子级别的，以前我自己灭菌的miniq的水也有条带

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180楼2018-11-08 15:19:31
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假大空

木虫之王 (文学泰斗)
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好运
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13楼2018-06-22 08:18:11
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
★
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操作污染了吧

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24楼2018-06-22 08:32:22
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tyeaptd2832楼
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gcdrhh153楼
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time8816楼
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