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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 双抗体夹心elisa时阳性对照不显色，OD值与阴性对照差不多？怎么回事
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关关雎鸠，，

新虫 (初入文坛)

[求助] 双抗体夹心elisa时阳性对照不显色，OD值与阴性对照差不多？怎么回事 已有2人参与

做的双抗体夹心elisa，自己用一抗包被板子的，作为阳性对照的重组蛋白基本不显色，OD值与阴性对照差不多，之前做过实验一切正常，但是最近做的就都出现了这种异常情况，只有阳性孔不显色，要检测的猪血清样品有正常显色，就是阳性孔对照孔不显色，这是怎么回事啊，我加样时重组蛋白是用PBST稀释的，求帮助！

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1楼 2018-06-21 15:14:35
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神
阳性对照反复冻溶次数多了，可能蛋白已经失活，建议从新换一只试试

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云山苍苍，江水泱泱，先生之风，山高水长
2楼2018-06-22 06:21:53
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关关雎鸠，，

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 159236478 at 2018-06-22 06:21:53
阳性对照反复冻溶次数多了，可能蛋白已经失活，建议从新换一只试试

蛋白做了考马斯亮蓝染色是有条带的，而且换过新的蛋白，也是如此

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3楼2018-06-26 22:47:15
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神

【答案】应助回帖

能够染色说明有蛋白，但不能说明有生物学活性！建议稀释阳性样本的话，用pbs试验下，不加吐温看看如何！可以的话做一个琼脂扩散实验，验证一下！
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云山苍苍，江水泱泱，先生之风，山高水长
4楼2018-06-27 14:30:12
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关关雎鸠，，

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 159236478 at 2018-06-27 14:30:12
能够染色说明有蛋白，但不能说明有生物学活性！建议稀释阳性样本的话，用pbs试验下，不加吐温看看如何！可以的话做一个琼脂扩散实验，验证一下！

我没有做过琼脂扩散试验，请问可以用wb验证么

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5楼2018-06-29 08:31:51
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神
引用回帖:
5楼: Originally posted by 关关雎鸠，， at 2018-06-29 08:31:51
我没有做过琼脂扩散试验，请问可以用wb验证么
...

可以的啊！
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云山苍苍，江水泱泱，先生之风，山高水长
6楼2018-07-09 11:11:36
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关关雎鸠，，

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 159236478 at 2018-07-09 11:11:36
可以的啊！...

做wb了，蛋白是有活性的

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7楼2018-07-10 09:36:48
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关关雎鸠，，

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 159236478 at 2018-07-09 11:11:36
可以的啊！...

elisa换成pbs稀释蛋白也是依旧不显色

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8楼2018-07-10 09:37:38
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神
引用回帖:
7楼: Originally posted by 关关雎鸠，， at 2018-07-10 09:36:48
做wb了，蛋白是有活性的
...

如果WB能够做成，说明抗体没有问题！重新包被个板子，看看如何
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云山苍苍，江水泱泱，先生之风，山高水长
9楼2018-07-10 10:45:08
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feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

用重组蛋白包被一下板子，然后封闭，用你的标记二抗加入，看看是否有颜色，如果有颜色，问题可能出现在包被一抗上面。
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10楼2018-10-16 16:53:13
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