24小时热门版块排行榜    

查看: 395  |  回复: 6
当前主题已经存档。

yuanfeng

金虫 (小有名气)

[交流] 紧急求助 TA克隆

各位高手,小弟这几天做TA克隆总是什么也不长?大家有遇到这种情况吗?指导一下吧  谢谢
我用的是Transgen的平端载体 片段用Pfu P的。片段量大约15ng/ul 、1500bp,载体10ng/ul 、3800bp,我用的是各1ul,25度连接15分钟。可是转化后什么都没有。感受态没问题,已经验证过了。是不是我的片段加的太少了,可是说明书上说总体系不要超过5ul,片段最多加4ul。
大家有没有也遇到过什么都不长的问题,告诉我一下经验吧。万分感谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

国产的东西就是容易不稳定
好用的时候觉得挺便宜,很实在,但是质量的不稳定性就是不敢恭维
还是用promega的T-easy吧
2楼2009-03-27 14:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

如水之星

银虫 (小有名气)

我都是用四微升啊,长的挺多
3楼2009-03-27 17:49:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanfeng

金虫 (小有名气)

哦 那我回来也用一下4ul吧
4楼2009-03-27 18:13:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

pfu P出来的要加A后才能用于连接哈,你P出来的产物直接连接能连出来么
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2009-03-27 20:53:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)

pfu出来的不能在3‘段加A,直接TA连接肯定连不上。建议pfu扩增的产物出来后用氯仿异戊醇抽提一下,70%乙醇沉淀,再加水重新溶解,然后配制成Taq反应体系,72度反应30分钟。然后可以回收后进行TA连接。
6楼2009-03-27 22:06:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

PFU是不是平端酶 啊 ,换下EX-taq,那个PCR完成时会在你片段后面自动加个A,所以这个PCR酶扩增的片段可以直接TA克隆
7楼2009-03-27 23:31:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yuanfeng 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[基金申请] 成果系统访问量大,请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦,已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 0856材料与化工,270求调剂 +5 YXCT 2026-03-01 5/250 2026-03-01 21:54 by 公瑾逍遥
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 0856求调剂285 +10 吕仔龙 2026-02-28 10/500 2026-03-01 21:37 by 公瑾逍遥
[考研] 0805总分292,求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[基金申请] 刚录用,没有期刊号,但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见