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wmm.

新虫 (小有名气)

[求助] 求助，求助 已有1人参与

本人在用tritonx-114提取膜蛋白，想请教最后怎么把它们分开，因为tritonx太粘稠了，跑sds时跑不好，

@hc-material 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-06-13 13:22:42
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

将Triton-114加入TBS（10mMTris，150mM NaCl，pH7.4）中形成终浓度1%的Triton-114，保存在4度，用时直接重悬细胞，冰浴作用30分钟后放入37度作用5-10分钟（根据管子大小），水平转头离心。

一些后续步骤：将上述沉淀（Triton-114与膜蛋白的混合物）加入9倍体积冰冻丙酮，冰浴40分钟，10000rpm离心20-30分钟，这时就可以将上层的丙酮和Triton-114一起去除，从而得到膜蛋白。
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3楼2018-06-13 14:02:14
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
萃取后，然后离心分离的油相，和PB混匀，放到4度会溶解，溶解后取一点电泳就好了
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2楼2018-06-13 13:45:15
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wmm.

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2018-06-13 14:02:14
将Triton-114加入TBS（10mMTris，150mM NaCl，pH7.4）中形成终浓度1%的Triton-114，保存在4度，用时直接重悬细胞，冰浴作用30分钟后放入37度作用5-10分钟（根据管子大小），水平转头离心。

一些后续步骤：将上述 ...

非常感谢，我会尝试一下

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4楼2018-06-14 08:54:00
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