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wmm.

新虫 (小有名气)

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本人在用tritonx-114提取膜蛋白,想请教最后怎么把它们分开,因为tritonx太粘稠了,跑sds时跑不好,

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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

将Triton-114加入TBS(10mMTris,150mM NaCl,pH7.4)中形成终浓度1%的Triton-114,保存在4度,用时直接重悬细胞,冰浴作用30分钟后放入37度作用5-10分钟(根据管子大小),水平转头离心。

一些后续步骤:将上述沉淀(Triton-114与膜蛋白的混合物)加入9倍体积冰冻丙酮,冰浴40分钟,10000rpm离心20-30分钟,这时就可以将上层的丙酮和Triton-114一起去除,从而得到膜蛋白。
3楼2018-06-13 14:02:14
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
萃取后,然后离心分离的油相,和PB混匀,放到4度会溶解,溶解后取一点电泳就好了
2楼2018-06-13 13:45:15
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wmm.

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2018-06-13 14:02:14
将Triton-114加入TBS(10mMTris,150mM NaCl,pH7.4)中形成终浓度1%的Triton-114,保存在4度,用时直接重悬细胞,冰浴作用30分钟后放入37度作用5-10分钟(根据管子大小),水平转头离心。

一些后续步骤:将上述 ...

非常感谢,我会尝试一下

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4楼2018-06-14 08:54:00
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