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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 光谱分析 » 有没有做过考马斯亮蓝测蛋白质含量的同学
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人生迷航

新虫 (小有名气)
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有没有做过考马斯亮蓝测蛋白质含量的同学
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我按100mg亮蓝，50mL无水乙醇，100mL85%磷酸定容至1000ml，做出来的染液是蓝绿色的，继续添加磷酸至红棕色。添加的磷酸量没有定量。
用这个测紫外，空白参比用蒸馏水，测的吸光度在671左右。
用染液做参比，测量加了10微克和40微克的样品，几乎没有峰。（加蛋白质溶液时有生成蓝色，但是又消失了，应该是浓度不够的原因吧）
请问我应该怎么做啊？加了蛋白质的溶液颜色几乎没有变化的。

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1楼 2018-06-07 17:57:52
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cha~cha

新虫 (初入文坛)
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1.不知道楼主用的染料是不是考马斯亮蓝G250，用酒精溶解时不太好溶，可以多吹打几次使染料尽量完全溶解：
2.染料配置好了之后，用0.45um过滤器过滤之后，遮光4℃放置，尽量在一个月之内用完：
3.做标曲的时候选择牛血清白蛋白为标准，制备浓度在1-0.1mg/ml；
4.充分混匀样品（标准）与染色剂，结合5-10min测定，1h之内测定，时间久了会出现蓝色结晶，一般染料结合后染色很明显而且结合时间很久
5.时间过程注意避光
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7楼2019-04-25 15:02:12
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511267624

金虫 (初入文坛)
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楼主有没有找到原因呢，我们最近也在做这个实验，遇到了同样的情况
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6楼2018-08-16 14:50:24
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努力飞的燕子

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
7楼: Originally posted by cha~cha at 2019-04-25 15:02:12
1.不知道楼主用的染料是不是考马斯亮蓝G250，用酒精溶解时不太好溶，可以多吹打几次使染料尽量完全溶解：
2.染料配置好了之后，用0.45um过滤器过滤之后，遮光4℃放置，尽量在一个月之内用完：
3.做标曲的时候选择 ...

您好，我也遇到了考马斯亮蓝测定样品不太准问题，想咨询下您这几个问题：方便帮忙解答下吗？
1.我配置的考马斯亮蓝定容后出现了絮状物，用滤纸过滤后有气泡，这会影响我考马斯亮蓝溶液的准确度吗？
2.样品和考马斯亮蓝反应后出现了小颗粒状蓝色混浊物，我1000转离心5分钟与3000转离心5分钟所测吸光值差距很大。想问下这是我离心转速的原因还是我反应后应该直接把整个液体去测紫外呢？

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8楼2019-06-04 22:32:22
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愿好_

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
1楼: Originally posted by 人生迷航 at 2018-06-07 17:57:52
我按100mg亮蓝，50mL无水乙醇，100mL85%磷酸定容至1000ml，做出来的染液是蓝绿色的，继续添加磷酸至红棕色。添加的磷酸量没有定量。
用这个测紫外，空白参比用蒸馏水，测的吸光度在671左右。
用染液做参比，测量加了 ...

是蛋白浓度太小了吧

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9楼2024-04-28 00:06:10
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hdchina20102楼
2018-06-07 17:58   回复  
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pandongzi3楼
2018-06-07 17:58   回复  
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xwpm225楼
2018-06-07 17:59   回复  
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11845531714楼
2018-06-07 17:59   回复  
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