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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 酵母工程菌利用乙醇作为发酵碳源时，乙醇不被利用的原因分析
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chenweilala

金虫 (小有名气)

[求助] 酵母工程菌利用乙醇作为发酵碳源时，乙醇不被利用的原因分析 已有4人参与

各位前辈及同事，大家好。

我现在在做一株酿酒酵母工程菌发酵产青蒿酸的实验，这个培养工艺要点是在发酵10-20小时后，需要向发酵罐中补加乙醇，充当发酵碳源。今年春节后，使用此酵母工程菌连续发酵几批次后发现，在发酵过程中会出现菌体消耗乙醇速度缓慢，乙醇蓄积严重等问题，而这个问题之前是从没有碰到过的，先前，乙醇是可以被菌株很好的消耗利用的。

为了解决这个问题，我们首先怀疑是菌种活力下降或者工程菌中质粒丢失，于是，我们从液氮中取出原始菌株，并利用抗生素进行复壮和选育，发现，原始菌株上罐后，依然会乙醇蓄积，乙醇不被菌体快速利用的问题。

随后，我们又怀疑是原料问题，于是，我们又将现有的原料全部重新置换成最新的原料，上罐后，依然发现菌体利用乙醇速度缓慢，随着发酵的进行，乙醇浓度逐渐升高，乙醇蓄积严重。

请问各位专家，既然不是菌种活力下降或者质粒丢失等本身的问题，也不是发酵原料问题，那为什么在发酵工艺参数一样的前提下，之前利用乙醇作为发酵碳源长势良好的酵母菌突然利用消耗乙醇的速度下降并导致乙醇蓄积严重了呢？
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1楼 2018-06-04 13:58:05
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chenweilala

金虫 (小有名气)
大家积极讨论啊，不能沉下去啊
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2楼2018-06-04 15:49:21
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xiaoqun1014

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenweilala at 2018-06-04 15:49:21
大家积极讨论啊，不能沉下去啊

你发酵过程中是怎么检测乙醇浓度的？
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3楼2018-07-04 13:32:52
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wsjtg123

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1、以前能够利用乙醇的菌株还有保存吗？有的话是不是可以提质粒测序鉴定或者与现在的菌株同时上罐？
2、可否在平板上加入乙醇对菌株进行驯化呢？
发酵有时候是一门艺术，真心搞不懂，哈哈，祝好！
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4楼2018-07-05 11:08:28
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凯恩血蹄

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

您计算过比生长速率吗？甲醇补料要建立数学模型，需要根据菌体数量而变化的，所以你的接种量或接种菌体浓度肯定发生了变化，导致甲醇浓度高，抑制了生长。
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5楼2018-07-09 18:57:31
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wangbingyu11

新虫 (小有名气)
1.可以在现有发酵液中试着分离一下高利用乙醇菌株。原因有可能因为菌株培养中发生变异。2，找一下已前的正常发酵液是否有保存，如果有分离一下后使用。3.提取一下质粒重新转化或是改造一下质粒增强表达再转化新菌株。4.检查设备情况，有可能设备问题。5.检测问题发酵液的杂菌，排除杂菌影响。

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6楼2018-07-15 19:06:03
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周志义1992

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我最近遇到的问题反而是酵母乙醇消耗过快，小罐乙醇消耗正常，放大时消耗过快。根据之前的经验，乙醇的消耗快慢跟酵母处于什么阶段有很大关系，生长期较快，产物表达期慢，当然跟菌的状态和发酵工艺也有关系。
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7楼2018-07-17 08:52:16
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小灰灰玩AFM

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主  为什么不回复？？？？不讨论
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8楼2018-07-20 14:01:56
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