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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于Southern blot
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虫子739

铁虫 (小有名气)

[交流] 关于Southern blot

请问在判断外援基因是否整合到基因组中，可以不用酶切基因组，直接Southern blot行吗？这样不能看出外援基因Copy数吧？请各位大侠指点！
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1楼 2009-03-25 16:52:28
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
基因组DNA电泳之后就是一条清晰的条带，大约十几kb或者几十kb，你若拿这样的模板做Southern blotting的结果还是一条带，更不用说拷贝数了......酶切基因组DNA之后电泳呈现弥散带，是因为内切酶将大片段的DNA酶解成无数的小片段，其中含有目的基因的小片段可以和探针结合，从而达到检测外源基因是否整合到宿主基因组中。
个人建议：这些知识比较基础，多看看southern blotting的原理，答案自然会自己明白的
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会当凌绝顶，一览众山小
2楼2009-03-26 05:30:22
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虫子739

铁虫 (小有名气)
我也觉得这样做根本不能看出拷贝数。可是我在发文章时，总是让我标出杂交条带大小，那不等于就是基因组大小吗，那我也不确定具体是十几还是二十几KB，最后实在没办法，根据Marker,标了一个大概的大小。
还有，人家说我的只是单拷贝，我很奇怪，为什么他们能看出来拷贝数，我明明没有酶切基因组！你说这样的问题我该怎么修改？
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3楼2009-03-26 18:01:34
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
引用回帖:
Originally posted by 虫子739 at 2009-3-26 18:01:
我也觉得这样做根本不能看出拷贝数。可是我在发文章时，总是让我标出杂交条带大小，那不等于就是基因组大小吗，那我也不确定具体是十几还是二十几KB，最后实在没办法，根据Marker,标了一个大概的大小。
还有，人 ...

你的基因组没有酶切
肯定杂交出来就是一条带
那人家一看肯定认为就是单拷贝了

其实呢 你都没有酶切，如果你的基因组没有降解，那这条带就是基因组带

你的这个southern只能说明转进去了，至于拷贝数，根本就看不出来

也许你对southern杂交的原理还有怎么判断有几个拷贝还不太理解。

再好好看看文献，然后再做southern吧
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4楼2009-03-26 23:43:25
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