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虫子739

铁虫 (小有名气)

[交流] 关于Southern blot

请问在判断外援基因是否整合到基因组中,可以不用酶切基因组,直接Southern blot行吗?这样不能看出外援基因Copy数吧?请各位大侠指点!
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

基因组DNA电泳之后就是一条清晰的条带,大约十几kb或者几十kb,你若拿这样的模板做Southern blotting的结果还是一条带,更不用说拷贝数了......酶切基因组DNA之后电泳呈现弥散带,是因为内切酶将大片段的DNA酶解成无数的小片段,其中含有目的基因的小片段可以和探针结合,从而达到检测外源基因是否整合到宿主基因组中。
个人建议:这些知识比较基础,多看看southern blotting的原理,答案自然会自己明白的
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-03-26 05:30:22
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虫子739

铁虫 (小有名气)

我也觉得这样做根本不能看出拷贝数。可是我在发文章时,总是让我标出杂交条带大小,那不等于就是基因组大小吗,那我也不确定具体是十几还是二十几KB,最后实在没办法,根据Marker,标了一个大概的大小。
还有,人家说我的只是单拷贝,我很奇怪,为什么他们能看出来拷贝数,我明明没有酶切基因组!你说这样的问题我该怎么修改?
3楼2009-03-26 18:01:34
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

引用回帖:
Originally posted by 虫子739 at 2009-3-26 18:01:
我也觉得这样做根本不能看出拷贝数。可是我在发文章时,总是让我标出杂交条带大小,那不等于就是基因组大小吗,那我也不确定具体是十几还是二十几KB,最后实在没办法,根据Marker,标了一个大概的大小。
还有,人 ...

你的基因组没有酶切
肯定杂交出来就是一条带
那人家一看肯定认为就是单拷贝了

其实呢 你都没有酶切,如果你的基因组没有降解,那这条带就是基因组带

你的这个southern只能说明转进去了,至于拷贝数,根本就看不出来

也许你对southern杂交的原理还有怎么判断有几个拷贝还不太理解。

再好好看看文献,然后再做southern吧
4楼2009-03-26 23:43:25
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