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向阳坊

铜虫 (正式写手)

[求助] 加尾法反转录miRNA后，qPCR能用普通试剂盒做吗？ 已有1人参与

加尾法反转录miRNA后，qPCR能用普通试剂盒做吗？就是反转录时用的是miscript Ⅱ RT kit，但是做qPCR时准备合成通用引物，用普通的SYBR Green 试剂盒做qPCR，可以吗？
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1楼 2018-05-29 17:00:53
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向阳坊

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 更深的蓝888 at 2018-05-29 18:10:43
不可以，miRNA-Realtime需两步法DNA酶要在很短时间激活处理，建议提取miRNA，反转录miR与定量只用一个公司的产品

弱弱地问一声，为什么茎环法的miRNA就可以用普通的qPCR呢？
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3楼2018-05-29 22:47:26
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更深的蓝888

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
向阳坊: 金币+10, ★★★很有帮助 2018-05-30 15:31:45
不可以，miRNA-Realtime需两步法DNA酶要在很短时间激活处理，建议提取miRNA，反转录miR与定量只用一个公司的产品
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天若有情天亦老
2楼2018-05-29 18:10:43
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更深的蓝888

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 向阳坊 at 2018-05-29 22:47:26
弱弱地问一声，为什么茎环法的miRNA就可以用普通的qPCR呢？...

sorry看晚了，这个要看定量扩增片段长度pri  -miRNA本身长度在100-200nt之间基本符合常规基因定量长度，而成熟的miRNA仅仅20左右nt片段，qRT肯定要特殊问题特殊的解决办法
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天若有情天亦老
4楼2018-06-13 18:36:32
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