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zouqin8091

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透析袋

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yusen_1982(金币+1,VIP+0):谢谢,欢迎常来生物材料版 4-2 17:17

透析是利用半透膜的选择性在溶液里分离大分子和小分子的一种分离技术，常常用于除去蛋白或核酸样品中的盐、变性剂、还原剂之类的小分子杂质，有时也用于置换样品缓冲液。样品在膜的一边，缓冲液在另一边，小分子即向两边扩散直到平衡透析是利用半透膜的选择性在溶液里分离大分子和小分子的一种分离技术，常常用于除去蛋白或核酸样品中的盐、变性剂、还原剂之类的小分子杂质，有时也用于置换样品缓冲液。样品在膜的一边，缓冲液在另一边，小分子即向两边扩散直到平衡,而大分子则由于半透膜的阻拦而留在一端，通过不断更换缓冲液，即可将样品中要除掉的小分子稀释到足够低的浓度。该技术自五十年代发展流行起来，主要使用半透膜制成的透析袋作为工具，一直存在透析时间长、样品回收率不高、无法处理微量样品的难题。
透析袋的处理
分子在半透膜间的分离是由膜两侧溶液的浓度差驱动的，受相对于膜内微孔尺寸的分子大小(分子质量)的限制。微孔尺寸决定着截留分子质量，截留分子质量的定义是当90%的溶质分子可被膜截留时的分子质量。实际某一溶质的通透性不仅取决于分子的大小，还取决于分子的形状、分子的水化程度及其所带的电荷。这些参数均受溶剂的性质、pH以及离子强度的影响。因此截留分子质量只能作为参考，而不能绝对地用来预测在各种溶质和溶剂下的透析行为。市售的透析膜孔径范围很大(从100Da到2 000kDa)。在透析大多数质粒DNA和许多蛋白质时，截留分子质量在12000～14000Da之间比较适合。
(1)将透析管剪成适当长度(10～20cm)的小段，即形成透析袋。
(2)在大体积的2%(m/v)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10 min。
(3)将透析袋用蒸馏水彻底漂洗。
(4)将透析袋置1 mmol/L EDTA(pH 8.0)中煮沸10min。
(5)待透析袋冷却，存放于4℃，应确保透析袋始终浸没在液体中。
重要：从此步起用透析袋时一定要戴手套操作。
(6)在使用之前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗。
[注]也可将透析袋放在广口瓶中充满水，松动瓶盖，于20psi(1.40 kg/cm2)高压灭菌10min代替第4步用1 mmol/L EDTA(pH8.0)煮沸10min的操作。
使用完后将透析袋浸泡在70％乙醇中以免长菌。