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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] PCR问题,急!!!

各位虫友,大家好。想请教一下PCR时的退火温度如何选择,谢谢。我用的试剂盒上写的是要比引物的熔化温度(变性温度)低10度左右,可是两条引物的变性温度是不同的,该以哪条引物为基准呢?

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-7 at 20:24 ]
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欣晴5832

金虫 (小有名气)

我觉得这要看你做什么了,要是多态性的话就低一点,扩特异性带的话就不要太低
5楼2009-03-25 08:44:43
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

TM值加减5度或者10度
会当凌绝顶,一览众山小
3楼2009-03-25 05:24:32
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子

影响不是特别大。如果不确定就选低的吧
生命的海洋里,我是蓝色的一滴
4楼2009-03-25 05:49:17
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redfoliage

铜虫 (初入文坛)

我觉得还是需要实验摸索最佳退火温度的,TM值减10度只是理论参考值,我一般会做个温度梯度,然后找出最佳退火温度,用具有温度梯度功能的PCR仪很方便
细节决定成败
6楼2009-03-25 09:27:15
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