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Nec99

新虫 (小有名气)

[交流] 荧光定量结果看哪些指标分析没有问题? 已有1人参与

我想知道看哪些指标知道我做的荧光定量没有问题?

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用户晓晓

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个最重要的几个指标是(拿到报告一般按照下面的次序来看数据):

1,溶解曲线,一个孔必须是单峰,且同一基因峰重合,且峰比较锐利。

2,扩增曲线圆滑,最终要有比较明显的平台期。

3,看CT值得范围(荧光定量CT值一般应该落在一个比较合适的范围,可能机器不同这个范围也不同,我自己的经验是CT值在15-30比较合理,太小或者太大都不会很准确)

4,也是最重要的就是看复孔(技术重复)之间的Cq error,大于0.4 我就不太能接受。

5,生物学重复之间的差异(或者就是说组间差异,这个可能跟qPCR没有啥关系,主要跟你的实验,样品情况有关,但是也是实验数据最终是否能采用的重要指标)

荧光定量是比较敏感的实验,重复实验是很有必要的!

有问题欢迎交流!


祝楼主实验顺利!
2楼2018-05-24 09:33:47
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