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植物叶片总RNA提取过程中的遗憾 已有5人参与
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最近用水稻嫩叶提取RNA，第一次按Tri-RNA-reagent 说明书来提取，除了碾磨期间尽量保持于液氮，其他操作都处于常温状态（低于25度），浓度和OD值一般，RNA都会有降解，但是可以合成cDNA,效果一般。今天按照孟国来的教授的建议全程保持于冰上，很多反应都处于冰上完成，RNA的完整性和降解明显小了，浓度和OD值依旧一般，但是合成的cDNA PCR不出来条带，提取RNA时，究竟是否需要冰上操作？ 发自小木虫IOS客户端 |
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用户晓晓
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2楼2018-05-16 15:24:31
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memorize1991
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4楼2018-05-16 18:15:16
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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我们实验室一般是这样做的，在实验室一角，开辟一处专用地点，用于RNA提取，地点选择是尽量周围不会常有人走动，即可。 然后，提之前将桌子等等都用抹布擦干净，主要是防止灰尘，然后铺一张干净的大滤纸，所有东西和试剂都是专用，这个大家应该都一样，提取的过程不需要在冰上，手套要保持干净，以前还经常会换，因为是戴那种PE手套，现在都是直接乳胶手套，中间可以用消毒酒精擦擦，干净些，基本就是这样了 提的效果稳定、质量较好，降解很少。 以前刚进实验室的时候，师兄师姐传下来都是要在超净里做，每次做都如临大敌，后来，老板说他在国外这么做，试验台上铺张滤纸就开干，RNA没那么容易降解，也就从了……也没什么事 主要还是一些细节，比如样品起始量，太多太少都不好，操作要熟练，不要吸入中间层，所用试剂要定期更换，避免污染，样品研磨要充分，理论上说只要样品被Trizol充分浸润，RNA酶都应该被抑制活性了，所以低温并不是必须的，我们做的时候也从来不保持低温。 祝好！ |
5楼2018-05-16 18:37:41
6楼2018-05-17 06:11:58
7楼2018-08-16 12:03:35
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匿名
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9楼2018-08-17 15:16:19