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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 关于WB一抗问题
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钱兰兰

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于WB一抗问题

因为WB我打算一天之内做完，做的actin，所以想的是一抗放4度孵育大概8个小时够么，因为我们实验室一抗不让放室温，说很容易失活

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1楼 2018-05-11 00:41:54
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
什么规矩啊，一抗放室温我们每次孵育1.5h，就这样一抗也可以反复用2-3次，根本没问题，抗体哪有那么脆弱。

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2楼2018-05-11 08:37:41
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
我们实验室就是一天出结果，从跑胶到曝光，没问题的。

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3楼2018-05-11 08:38:47
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yh19870423

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-05-11 08:38:47
我们实验室就是一天出结果，从跑胶到曝光，没问题的。

你们是怎么做的啊？一天可以搞定？
我们实验室也有一些可以一天出结果，预制胶，封闭一抗二抗一起孵育，但是做内参还行，做其他的抗体就效果不太好，可以说说你们是怎么做的吗？
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4楼2018-05-12 10:19:38
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yh19870423

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-05-11 08:38:47
我们实验室就是一天出结果，从跑胶到曝光，没问题的。

能说一下你们是怎么做的吗？我现在是每个周六都要加班，实在是不想加班啊，能指导下吗？怎么样才能在一天内从配胶到最后显色都能很好地完成呢？
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5楼2018-05-12 10:23:35
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
早上8点半开始电泳，一个小时基本电泳完成，湿转一个半小时到两个小时结束，封闭一个小时，一抗室温孵育2小时，TBST洗涤三次20分钟，二抗室温孵育1小时，TBST洗涤20分钟，曝光。

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6楼2018-05-12 22:13:09
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