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Allon857

新虫 (初入文坛)

[求助] pet32a载体、bl21菌种、his标签 已有1人参与

用pet32a构建jnk基因表达载体,在bl21菌种中表达带有his标签的融合蛋白,iptg诱导表达后进行western blot检测,发现有两条带。其中一条约45kd应该是目的蛋白吧,但是为什么有另一条杂带呢??听说用pet28载体好像没有杂带

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Jack1508

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有个误区,不是28a就没有杂带。这个看蛋白表达的情况。
您的32a有2条带,原因比较多,蛋白发生降解作用。蛋白表达时候发生了部分修饰之类的都有可能。
2楼2018-05-10 16:09:57
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

pet32a有个trx标签,还有肠激酶的酶切位点,会不会融合蛋白断裂,如果你目的蛋白45kd,trx标签17kd,那你另外一条带是不是差不多28kd

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3楼2018-05-10 20:55:45
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

pet28a只有6个his额外表达的氨基酸很少

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4楼2018-05-10 20:56:38
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