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从前有张饼

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位大佬,有关于使用中空纤维膜浓缩蛋白的问题 已有1人参与

萌新一枚,想请教各位,使用中空纤维膜浓缩蛋白会造成大量的蛋白浪费吗?

最近纯化了一批蛋白,浓度在0.18mg/ml,体积150ml,因为浓度太低想浓缩到0.5左右,大概估算了一下觉得能浓缩出50ml左右。使用中空纤维膜浓缩的,但实际浓缩完之后只有16ml,浓度也才0.47,算了一下蛋白总量差很多,求问各位大佬这正常吗,因为是第一次做浓缩,不太确定。
补充信息:
(1)纤维膜的孔径没问题,连接也没有问题;
(2)因为第一次不熟练,在收到透出液大概40ml左右的时候,突然怀疑柱子连错了,就脑袋一抽把透出液又倒回样品里了。但是之后检查一遍发现没连错,就继续上样收透出液了,中间可能浪费了一点点浓缩液,不超过5ml(估计也就2ml左右),不知道这样会不会有影响
(3)蛋白样品电泳检测过了,很纯,没有杂蛋白

五一放假之前做的,结果不正常一直很忐忑,如果有知道的大佬请指教啊,拜托拜托!!
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chen_xiao_xu

银虫 (正式写手)

中空纤维浓缩,要控制好条件,温度,溶液PH,离子强度,还有流速等,都十分关键,蛋白损失很多,可能是糊在柱子上了,压力有没有增大,流速有没有减慢,在一个就是蛋白在浓缩过程中聚集沉淀了等

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2楼2018-05-03 12:55:05
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

中空纤维孔径和蛋白差了多少,会不会有一部分蛋白在透析液中

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只有拼出来的美丽,没有等出来的辉煌!
3楼2018-05-04 20:59:49
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朽木羊

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你浓缩之后有没有用缓冲液再过一遍?跨膜压力和切向流速有没有控制?
4楼2018-05-25 12:47:46
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