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hu持剑人

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR有杂带如何解决？ 已有7人参与

PCR有杂带如何解决，退火温度已由45试到了58

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1楼 2018-04-27 20:27:17
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爱学习的小洋

新虫 (著名写手)
★
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-05-04 05:10:56
重新设计引物

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2楼2018-04-27 20:47:01
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时东亚

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物热变性，pcr热启动试试！

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3楼2018-04-27 22:58:54
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diaomou

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1，继续提高退火温度。

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4楼2018-04-27 23:14:25
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diaomou

新虫 (小有名气)
2，做巢式PCR

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5楼2018-04-27 23:14:58
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小小不点爱

新虫 (正式写手)
模板

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6楼2018-04-28 01:06:55
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萤火虫之谷

新虫 (文学泰斗)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以试试 touchdown PCR

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7楼2018-04-28 05:15:07
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suki_lee

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
drwhoknowss: 金币+3, 鼓励交流 2018-05-04 05:11:17
前面几楼的建议都不错。你要考虑的因素也就是这么几个：模板、引物、温度、体系、是否存在污染。如果你选择的基因本身就是多拷贝的，有多条带是很可能的；如果你的模板本身是杂交的或者多倍化起源的，也有这个可能，模板浓度过低降解了的，很容易扩出来杂带有拖带；引物本身的特异性不强，可能产生多种不同产物，那么需要重新设计引物；退火温度一开始就应该跑梯度找效果最好的温度，效果还是不好的话可以试试touchdown PCR；如果存在污染，那扩增出来的可能就是别的物种了，可以增加对照组。
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8楼2018-05-03 22:43:15
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BIOTEK

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
9楼2018-05-03 23:22:22
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