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饱和硫酸铵沉淀的目的是什么?
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最近在做重组人生长激素的纯化,参考了两篇论文都是将细菌裂解后用45%饱和硫酸铵沉淀,沉淀用10mM Tris-HCl复溶,再用G-25用水脱盐。我自己试了一下发现目的蛋白能够全部沉淀,但杂质也全部沉淀,上清跑SDS没看到蛋白,那这样饱和硫酸铵沉淀又有什么作用呢?我打算自己摸索一下硫酸铵浓度梯度,那我应该以什么为指标来看什么浓度最合适? 10mM Tris-HCl电导不高吧,为什么要脱盐呢,那为什么不直接用水复溶? |
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