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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 怎么测反转出来的cDNA全长
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草哥cium

新虫 (正式写手)

[求助] 怎么测反转出来的cDNA全长 已有1人参与

我用rna反转出来了cDNA，能不能把cdna跑一下胶看看有多长。然后连到T载体上去测序呀。。
。或者其他简单办法可以知道cdna全序列吗?

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-04-26 12:20:36
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wareer

铜虫 (小有名气)
RNA本来就是混合物，反转合成的cDNA也是混合物啊，你做的不对。除非用引物从cDNA中扩增某个基因，才可行。

发自小木虫Android客户端
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2楼2018-04-26 15:07:47
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
草哥cium: 金币+5, ★★★很有帮助 2018-04-27 00:27:23
反转的cDNA可以跑胶看，最好能跑安捷伦2100 HS芯片检测，比较直观，克隆到t载体送sanger肯定没法测。如果想测全长cDNA，pacbio三代测序iso-seq，了解一下。
流程大概race方法反转mRNA,用通用引物扩全长cDNA,三代加接头建库，在sequel或RSII平台上机测序。跟二代RNAseq比，三代可以直接测出全长转录本，不用预测和拼接，一般用在转录本注释上。
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2019更好更棒!
3楼2018-04-26 17:21:21
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