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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » pMG36e质粒提取
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810763156

新虫 (小有名气)

[交流] pMG36e质粒提取

买回来的含有pMG36e表达载体的DH5a的菌株 一直提不出来质粒。菌又长得很好 请求各位大神帮忙

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1楼 2018-04-25 12:44:00
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
红霉素加少了，建议加到300ng每微升

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2楼2018-04-26 10:51:03
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wuyiping

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-04-27 07:57:49
1.像这种问题，最好是直接打电话问相关公司的技术支持  2. 不知道抗生素是什么，不过一般情况下质粒的拷贝数与抗生素的浓度呈正相关，太高肯定就死了，你可以做个剃度  3. 确定抗生素没问题，菌也没问题的话，以量取胜，用试剂盒正常提取，最后一步加到一个吸附柱里再洗脱

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3楼2018-04-27 01:37:21
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yangtzelv

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
购买大量提取试剂盒，一次多提取一些，保存备用。
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4楼2018-04-28 14:24:39
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810763156

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by yangtzelv at 2018-04-28 14:24:39
购买大量提取试剂盒，一次多提取一些，保存备用。

它是一个低拷贝的质粒。你原来提取过这个吗 我提几次了。还是没有效果

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5楼2018-04-29 09:59:32
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
★
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试试purimag的试剂盒，他们技术支持比较专业

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6楼2018-05-09 00:33:05
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小小孙ss

新虫 (初入文坛)
★
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2楼: Originally posted by biosci at 2018-04-26 10:51:03
红霉素加少了，建议加到300ng每微升

请问你用的什么牌子的红霉素，我转化一直长自一片，有点怀疑是抗生素的问题。

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7楼2018-06-13 23:45:06
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小小孙ss

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 810763156 at 2018-04-25 12:44:00
买回来的含有pMG36e表达载体的DH5a的菌株 一直提不出来质粒。菌又长得很好 请求各位大神帮忙

请问你用的什么牌子的红霉素，我用pmg36e构建载体做转化一直长一片，有点怀疑是抗生素的问题。

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8楼2018-06-13 23:45:54
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小小孙ss

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 810763156 at 2018-04-25 12:44:00
买回来的含有pMG36e表达载体的DH5a的菌株 一直提不出来质粒。菌又长得很好 请求各位大神帮忙

我一般摇菌摇的时间长一点就可以了，我一般摇三天

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9楼2018-06-13 23:46:42
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