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踩着飞机走

新虫 (小有名气)

[求助] 单链DNA杂交成双链,以及固定在电极上的问题 已有2人参与

我是将两条DNA单链杂交,然后再将杂交的链固定在电极上,DNA是39bp的,我用的PBS7.4的缓冲,0.5M的氯化钠和1mM的氯化镁为杂交缓冲。单链DNA在杂交缓冲里面90度加热10分钟,然后冷却至室温,在将两条链杂交一小时。最后混合液4度固定在电极上过夜。有没有大神能帮我看看这样的步骤有没有问题,感觉我的实验结果有点不对

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小小不点爱

新虫 (正式写手)

2楼2018-04-23 21:30:23
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小小不点爱

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小不点爱 at 2018-04-23 21:30:23

手误哈,我不太懂

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3楼2018-04-23 21:31:37
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aishida

禁虫 (职业作家)

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4楼2018-04-23 23:08:05
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踩着飞机走

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by aishida at 2018-04-23 23:08:05
在双链杂交的时候,可以选择95℃变性之后每秒降温0.1℃这种方式。

好的,我想问一下,这个顺序,先加热降温再将两条链混合,先加热再在降温的过程中将两条链混合的话有没有影响

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5楼2018-04-24 08:08:04
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aishida

禁虫 (职业作家)

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6楼2018-04-24 09:35:06
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踩着飞机走

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by aishida at 2018-04-24 09:35:06
就杂交来说是没啥影响的,你分开变性不就多了个步骤吗
...

谢谢你,也就是说无论是双链DNA先混合,再加热降温,还是降温之后再将两条链混合都没有影响吗?不好意思,因为我是学化学的,所以不是很懂这方面

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7楼2018-04-24 09:40:04
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aishida

禁虫 (职业作家)

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8楼2018-04-24 09:47:47
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成熟质

禁虫 (正式写手)

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9楼2018-04-24 11:14:31
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踩着飞机走

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by aishida at 2018-04-24 09:47:47
不能降温之后才混合,直接先混合再一起变形,降温即可
...

谢谢

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10楼2018-04-24 11:41:54
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