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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 单链DNA杂交成双链，以及固定在电极上的问题
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踩着飞机走

新虫 (小有名气)

[求助] 单链DNA杂交成双链，以及固定在电极上的问题 已有2人参与

我是将两条DNA单链杂交，然后再将杂交的链固定在电极上，DNA是39bp的，我用的PBS7.4的缓冲，0.5M的氯化钠和1mM的氯化镁为杂交缓冲。单链DNA在杂交缓冲里面90度加热10分钟，然后冷却至室温，在将两条链杂交一小时。最后混合液4度固定在电极上过夜。有没有大神能帮我看看这样的步骤有没有问题，感觉我的实验结果有点不对

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1楼 2018-04-23 21:18:45
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小小不点爱

新虫 (正式写手)
好

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2楼2018-04-23 21:30:23
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小小不点爱

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小不点爱 at 2018-04-23 21:30:23
好

手误哈，我不太懂

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3楼2018-04-23 21:31:37
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aishida

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4楼2018-04-23 23:08:05
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踩着飞机走

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by aishida at 2018-04-23 23:08:05
在双链杂交的时候，可以选择95℃变性之后每秒降温0.1℃这种方式。

好的，我想问一下，这个顺序，先加热降温再将两条链混合，先加热再在降温的过程中将两条链混合的话有没有影响

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5楼2018-04-24 08:08:04
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aishida

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踩着飞机走
6楼2018-04-24 09:35:06
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踩着飞机走

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by aishida at 2018-04-24 09:35:06
就杂交来说是没啥影响的，你分开变性不就多了个步骤吗
...

谢谢你，也就是说无论是双链DNA先混合，再加热降温，还是降温之后再将两条链混合都没有影响吗？不好意思，因为我是学化学的，所以不是很懂这方面

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7楼2018-04-24 09:40:04
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aishida

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踩着飞机走
8楼2018-04-24 09:47:47
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成熟质

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9楼2018-04-24 11:14:31
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踩着飞机走

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
8楼: Originally posted by aishida at 2018-04-24 09:47:47
不能降温之后才混合，直接先混合再一起变形,降温即可
...

谢谢

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10楼2018-04-24 11:41:54
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