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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用什么酶可以从目的质粒中扩增出大片段（大概6k）？
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yahuizhang

新虫 (初入文坛)

[交流] 用什么酶可以从目的质粒中扩增出大片段（大概6k）？ 已有5人参与

实验新手，困扰了很久的问题，希望看到帖子的有缘人能帮帮忙解答一下，在此鞠躬感谢！
我想把我的目的片段连接到表达载体上，之前一直尝试酶切连接，可一直连不上。现在想用同源重组的方法，把片段通过pcr扩增出来，然后与载体连接。可是试了金牌MIX和PRIMER START HS DNA。都扩不出来目的片段，希望有经验的前辈能分享一下经验。

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1楼 2018-04-22 17:01:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wareer

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-04-23 08:37:22
诺维赞，愚公的高保真酶应该都可以的，我试3k的毫无压力。说明书说的可以到10k

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2楼2018-04-22 17:40:46
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普通回帖

GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-04-23 08:37:08
NEB的phusion，6k应该问题不大。之前做SLIC和点突变亲测8k质粒无压力。
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2019更好更棒!
3楼2018-04-22 21:02:21
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试试primeSTAR GXL，8kb做过没难度。
注意亮点：1，没有GCrich的片段。 2.PCR模版量要少，不超过1ng
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2018-04-23 08:39:03
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cry_2013

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果以质粒为模板PCR扩增很多常见公司的酶应该都可以，如果其它的模板就不好扩了，影响因素比较多。。。
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5楼2018-04-23 15:34:22
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applefav

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果GXL不行，就用NEB Q5 2x Master mix。

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6楼2018-04-23 16:25:56
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applefav

新虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cry_2013 at 2018-04-23 15:34:22
如果以质粒为模板PCR扩增很多常见公司的酶应该都可以，如果其它的模板就不好扩了，影响因素比较多。。。

哈哈，英雄所见略同，GXL对GC rich的也还好

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7楼2018-04-23 16:26:28
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applefav

新虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-04-23 08:39:03
试试primeSTAR GXL，8kb做过没难度。
注意亮点：1，没有GCrich的片段。 2.PCR模版量要少，不超过1ng

哈哈，英雄所见略同，GXL对GC rich的也还好

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8楼2018-04-23 16:27:23
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yahuizhang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wareer at 2018-04-22 17:40:46
诺维赞，愚公的高保真酶应该都可以的，我试3k的毫无压力。说明书说的可以到10k

谢谢

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9楼2018-04-23 16:47:50
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yahuizhang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-04-23 08:39:03
试试primeSTAR GXL，8kb做过没难度。
注意亮点：1，没有GCrich的片段。 2.PCR模版量要少，不超过1ng

谢谢解答噢，我也有查到这个酶，我后面试试

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10楼2018-04-23 16:50:23
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