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yahuizhang

新虫 (初入文坛)

[交流] 用什么酶可以从目的质粒中扩增出大片段(大概6k)?已有5人参与

实验新手,困扰了很久的问题,希望看到帖子的有缘人能帮帮忙解答一下,在此鞠躬感谢!
我想把我的目的片段连接到表达载体上,之前一直尝试酶切连接,可一直连不上。现在想用同源重组的方法,把片段通过pcr扩增出来,然后与载体连接。可是试了金牌MIX和PRIMER START HS DNA。都扩不出来目的片段,希望有经验的前辈能分享一下经验。

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wareer

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-04-23 08:37:22
诺维赞,愚公的高保真酶应该都可以的,我试3k的毫无压力。说明书说的可以到10k

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2楼2018-04-22 17:40:46
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-04-23 08:37:08
NEB的phusion,6k应该问题不大。之前做SLIC和点突变亲测8k质粒无压力。
2019更好更棒!
3楼2018-04-22 21:02:21
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试试primeSTAR GXL,8kb做过没难度。
注意亮点:1,没有GCrich的片段。 2.PCR模版量要少,不超过1ng
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2018-04-23 08:39:03
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cry_2013

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果以质粒为模板PCR扩增很多常见公司的酶应该都可以,如果其它的模板就不好扩了,影响因素比较多。。。
5楼2018-04-23 15:34:22
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applefav

新虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果GXL不行,就用NEB Q5 2x Master mix。

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6楼2018-04-23 16:25:56
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applefav

新虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cry_2013 at 2018-04-23 15:34:22
如果以质粒为模板PCR扩增很多常见公司的酶应该都可以,如果其它的模板就不好扩了,影响因素比较多。。。

哈哈,英雄所见略同,GXL对GC rich的也还好

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7楼2018-04-23 16:26:28
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applefav

新虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-04-23 08:39:03
试试primeSTAR GXL,8kb做过没难度。
注意亮点:1,没有GCrich的片段。 2.PCR模版量要少,不超过1ng

哈哈,英雄所见略同,GXL对GC rich的也还好

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8楼2018-04-23 16:27:23
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yahuizhang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wareer at 2018-04-22 17:40:46
诺维赞,愚公的高保真酶应该都可以的,我试3k的毫无压力。说明书说的可以到10k

谢谢

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9楼2018-04-23 16:47:50
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yahuizhang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-04-23 08:39:03
试试primeSTAR GXL,8kb做过没难度。
注意亮点:1,没有GCrich的片段。 2.PCR模版量要少,不超过1ng

谢谢解答噢,我也有查到这个酶,我后面试试

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10楼2018-04-23 16:50:23
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