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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 前处理 » 请教一下用LC-MS定量的相关问题
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Clytze9

金虫 (小有名气)

[交流] 请教一下用LC-MS定量的相关问题

要定量分析测微生物培养液中某个化合物的含量，现在有这个化合物的同位素标记物作为内标，有以下几个问题：

（1）内标法来定量分析时，是否需要绘制标准曲线？不能直接通过加入内标物的含量直接定量么？如果需要绘制标准曲线，纵坐标要是什么？
（2）看文献中定量分析的都有计算回收率，回收率是必要的么？用内标法得到的数值是否还需要除以回收率计算回去？
（3）回收率怎么得到，能不能直接空白基质加入一定量内标物，然后通过前处理，再定量分析能得到的化合物含量，由此得到内标物？

文章revise需要，各位大神看过来 啊，跪谢！！
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1楼 2018-04-21 16:51:53
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wslmpolm

新虫 (初入文坛)
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Clytze9(金币+1): 谢谢参与
Clytze9: 金币+10 2018-04-22 14:44:28
简单回答下楼主的问题：
（1）内标法来定量分析时，是否需要绘制标准曲线？不能直接通过加入内标物的含量直接定量么？如果需要绘制标准曲线，纵坐标要是什么？
答：需要绘制标准曲线。哪怕标准曲线只有一个点，也需要得到线性方程以计算样品中待测物的含量。内标法一般来讲是要得到这两个变量的关系：待测物浓度/内标物浓度与待测物响应值/内标物响应值，所以纵坐标是待测物响应值/内标物响应值。至于具体标准曲线和待测物的计算方法，可以去网上搜索，一搜一大堆。
（2）看文献中定量分析的都有计算回收率，回收率是必要的么？用内标法得到的数值是否还需要除以回收率计算回去？
答：较合理的回收率可以证明你的分析方法是准确的。如果你能做到很好的回收率（比如90%-110%），不妨把回收率数据放进文章。“用内标法得到的数值是否还需要除以回收率计算回去？”这个问题你是不是想问最终的测试结果是不是要通过回收率来校正？我的答案是不需要。回收率只是一个表征分析方法准确度的指标，并不是用来消除测试误差的。
（3）回收率怎么得到，能不能直接空白基质加入一定量内标物，然后通过前处理，再定量分析能得到的化合物含量，由此得到内标物？
答：回收率的计算方法基本就是你说的这样。但你说“由此得到内标物”我没搞懂，回收率计算的是待测物的测试准确度，跟内标物的含量无关。
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28楼2018-04-22 11:18:42
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tableman

木虫之王 (文学泰斗)
★
Clytze9(金币+1): 谢谢参与
花开富贵
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17楼2018-04-22 00:40:18
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liuqiang68

至尊木虫 (文坛精英)
★
Clytze9(金币+1): 谢谢参与
加油!
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26楼2018-04-22 06:47:22
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Clytze9

金虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by wslmpolm at 2018-04-22 11:18:42
简单回答下楼主的问题：
（1）内标法来定量分析时，是否需要绘制标准曲线？不能直接通过加入内标物的含量直接定量么？如果需要绘制标准曲线，纵坐标要是什么？
答：需要绘制标准曲线。哪怕标准曲线只有一个点，也 ...

谢谢这位盆友 很详细 最后一个问题是我打错了 想说是不是由此得到回收率 懂了 谢谢！
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29楼2018-04-22 14:45:11
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evan2571

至尊木虫 (知名作家)
★
Clytze9(金币+1): 谢谢参与
great

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31楼2018-04-22 15:18:37
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繁夏

版主 (知名作家)
★
Clytze9(金币+1): 谢谢参与
回收率是来分析你所采用的前处理方法合理性的。回收不好，说明前处理过程损失过大

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33楼2018-04-22 17:51:36
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繁夏

版主 (知名作家)
内标法算回收不是只加内标就可以了，还需要加标准溶液。你还需要多看一些概念性的东西，一味看文献不得行

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34楼2018-04-22 17:53:05
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Clytze9

金虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by wslmpolm at 2018-04-22 11:18:42
简单回答下楼主的问题：
（1）内标法来定量分析时，是否需要绘制标准曲线？不能直接通过加入内标物的含量直接定量么？如果需要绘制标准曲线，纵坐标要是什么？
答：需要绘制标准曲线。哪怕标准曲线只有一个点，也 ...

亲 我再请教一个问题哈 就是我培养不同微生物得到的样品 经过前处理 定量检测其中某个化合物的含量 最后得到的结果是 不同的微生物培养得到的样品 谱图都很类似 这种情况正常嘛？
难道是因为我定量分析的某一个化合物所以才导致扫描离子对得到的谱图才类似？

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44楼2018-04-25 15:29:40
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wslmpolm

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
44楼: Originally posted by Clytze9 at 2018-04-25 15:29:40
亲 我再请教一个问题哈 就是我培养不同微生物得到的样品 经过前处理 定量检测其中某个化合物的含量 最后得到的结果是 不同的微生物培养得到的样品 谱图都很类似 这种情况正常嘛？
难道是因为我定量分析的某一个化合 ...

离子对谱图是用来定性的，也就是说：通过运行标样，可以找到该物质的分子离子和子离子峰。做样品时再通过保留时间、分子离子和子离子的分子量和峰高比值就可以对样品定性分析。
你问的谱图很类似指的是离子对图谱很类似还是色谱图类似？如果是不同样品离子对谱图类似，那说明这些不同样品里都含有同一种待测物。
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45楼2018-04-26 15:10:20
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Clytze9

金虫 (小有名气)
引用回帖:
45楼: Originally posted by wslmpolm at 2018-04-26 15:10:20
离子对谱图是用来定性的，也就是说：通过运行标样，可以找到该物质的分子离子和子离子峰。做样品时再通过保留时间、分子离子和子离子的分子量和峰高比值就可以对样品定性分析。
你问的谱图很类似指的是离子对图谱 ...

嗯 我就是为了检测这些待测样品中某个化合物的含量 可以确定他们有 就是在定量
现在是得到的MRM监测模式下出现的那个谱图比较类似 如果我的样品中都含有这个化合物的话 通过离子对定量 得到的谱图应该就是会比较相似的吧？

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46楼2018-04-26 15:14:48
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wslmpolm

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
46楼: Originally posted by Clytze9 at 2018-04-26 15:14:48
嗯 我就是为了检测这些待测样品中某个化合物的含量 可以确定他们有 就是在定量
现在是得到的MRM监测模式下出现的那个谱图比较类似 如果我的样品中都含有这个化合物的话 通过离子对定量 得到的谱图应该就是会比较相 ...

是的，如果不同样品中都含有这个化合物的话，MRM模式运行出来的色谱图都会在同一个保留时间有峰，而且这些样品峰的离子对中两个峰高的比例差别不大。
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47楼2018-04-26 15:40:48
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Clytze9

金虫 (小有名气)
引用回帖:
47楼: Originally posted by wslmpolm at 2018-04-26 15:40:48
是的，如果不同样品中都含有这个化合物的话，MRM模式运行出来的色谱图都会在同一个保留时间有峰，而且这些样品峰的离子对中两个峰高的比例差别不大。...

如果我是不同来源的样品经过处理来检测这个特定的化合物 谱图类似应该也是正常的吧？毕竟是通过母离子和子离子共同来定量的 可以这么理解么？

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48楼2018-04-26 15:43:11
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同位素试剂

捐助贵宾 (初入文坛)
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需要同位素内标可以联系：hart@reertech.com；18017266716
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49楼2018-04-27 10:09:01
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安心1314152楼
2018-04-21 17:20   回复  
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KDME3楼
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youngen4楼
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danghaha5楼
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xiaoqiuqiu206楼
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longwave7楼
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syhorchid8楼
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slytjiaofei9楼
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nono200910楼
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tzynew11楼
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