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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 无菌滤液制备
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远方灬风

铜虫 (小有名气)

[求助] 无菌滤液制备 已有1人参与

取同种细菌不同生长阶段4,14,20小时的发酵液，制备无菌滤液。将发酵液5000r/min,15min的离心处理，再取上清液用0.22um的过滤头去菌体。为什么将自认为的无菌滤液进行平板试验的时候空白对照和4小时没有菌落出现但是14和20小时出现许多小菌落？求大神指点，谢谢！

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1楼 2018-04-19 00:12:35
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qdw54321

金虫 (小有名气)
小菌落是你的细菌么

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做我想做
2楼2018-04-19 00:34:04
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远方灬风

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qdw54321 at 2018-04-19 00:34:04
小菌落是你的细菌么

嗯，就是发酵时间不同，同样的操作，14和20小时无菌滤液没有达到预期的无菌效果，但是空白和4小时的都没有问题

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3楼2018-04-19 01:16:37
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qdw54321

金虫 (小有名气)
没除菌完全洛，一般细菌直接是大于0.22微米的，可能是刚分裂，没长大的小细菌啊。4小时的没有，可能还是延滞期，或者细菌少，没涂出，也可以理解

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做我想做
4楼2018-04-19 07:29:05
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远方灬风

铜虫 (小有名气)
那应该怎么做？

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5楼2018-04-19 09:07:09
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远方灬风

铜虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by qdw54321 at 2018-04-19 07:29:05
没除菌完全洛，一般细菌直接是大于0.22微米的，可能是刚分裂，没长大的小细菌啊。4小时的没有，可能还是延滞期，或者细菌少，没涂出，也可以理解

那应该怎么做？

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6楼2018-04-19 09:07:46
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先，我的判断是体系污染了，你用的过滤针头，放置过滤液的管子，可能都被污染了，建议都灭菌，整个操作在超净台或者生物安全柜里面做。
其次，离心转速太低了，至少1w g 10-15分钟吧，发酵液可能有很多胶体，会不会过滤的时候因为堵孔，破损，导致过滤器失效了啊。
最后，过滤除菌一般0.44就够了，0.22是去除孢子用的，过滤效率很低，可能因为这样，你用了很大的力气去推液了。膜挂了，菌没滤好
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远方灬风 远方灬风
7楼2018-04-19 11:15:48
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远方灬风

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-04-19 11:15:48
首先，我的判断是体系污染了，你用的过滤针头，放置过滤液的管子，可能都被污染了，建议都灭菌，整个操作在超净台或者生物安全柜里面做。
其次，离心转速太低了，至少1w g 10-15分钟吧，发酵液可能有很多胶体，会不 ...

嗯，谢谢

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8楼2018-04-19 13:56:46
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远方灬风

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-04-19 11:15:48
首先，我的判断是体系污染了，你用的过滤针头，放置过滤液的管子，可能都被污染了，建议都灭菌，整个操作在超净台或者生物安全柜里面做。
其次，离心转速太低了，至少1w g 10-15分钟吧，发酵液可能有很多胶体，会不 ...

嗯，谢谢

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9楼2018-04-19 13:57:03
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