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远方灬风

铜虫 (小有名气)

[求助] 无菌滤液制备 已有1人参与

取同种细菌不同生长阶段4,14,20小时的发酵液,制备无菌滤液。将发酵液5000r/min,15min的离心处理,再取上清液用0.22um的过滤头去菌体。为什么将自认为的无菌滤液进行平板试验的时候空白对照和4小时没有菌落出现但是14和20小时出现许多小菌落?求大神指点,谢谢!

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qdw54321

金虫 (小有名气)

做我想做
2楼2018-04-19 00:34:04
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远方灬风

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by qdw54321 at 2018-04-19 00:34:04
小菌落是你的细菌么

嗯,就是发酵时间不同,同样的操作,14和20小时无菌滤液没有达到预期的无菌效果,但是空白和4小时的都没有问题

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3楼2018-04-19 01:16:37
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qdw54321

金虫 (小有名气)

没除菌完全洛,一般细菌直接是大于0.22微米的,可能是刚分裂,没长大的小细菌啊。4小时的没有,可能还是延滞期,或者细菌少,没涂出,也可以理解

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做我想做
4楼2018-04-19 07:29:05
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远方灬风

铜虫 (小有名气)

5楼2018-04-19 09:07:09
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远方灬风

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by qdw54321 at 2018-04-19 07:29:05
没除菌完全洛,一般细菌直接是大于0.22微米的,可能是刚分裂,没长大的小细菌啊。4小时的没有,可能还是延滞期,或者细菌少,没涂出,也可以理解

那应该怎么做?

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6楼2018-04-19 09:07:46
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先,我的判断是体系污染了,你用的过滤针头,放置过滤液的管子,可能都被污染了,建议都灭菌,整个操作在超净台或者生物安全柜里面做。
其次,离心转速太低了,至少1w g 10-15分钟吧,发酵液可能有很多胶体,会不会过滤的时候因为堵孔,破损,导致过滤器失效了啊。
最后,过滤除菌一般0.44就够了,0.22是去除孢子用的,过滤效率很低,可能因为这样,你用了很大的力气去推液了。膜挂了,菌没滤好

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2018-04-19 11:15:48
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远方灬风

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-04-19 11:15:48
首先,我的判断是体系污染了,你用的过滤针头,放置过滤液的管子,可能都被污染了,建议都灭菌,整个操作在超净台或者生物安全柜里面做。
其次,离心转速太低了,至少1w g 10-15分钟吧,发酵液可能有很多胶体,会不 ...

嗯,谢谢

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8楼2018-04-19 13:56:46
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远方灬风

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-04-19 11:15:48
首先,我的判断是体系污染了,你用的过滤针头,放置过滤液的管子,可能都被污染了,建议都灭菌,整个操作在超净台或者生物安全柜里面做。
其次,离心转速太低了,至少1w g 10-15分钟吧,发酵液可能有很多胶体,会不 ...

嗯,谢谢

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9楼2018-04-19 13:57:03
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